彩色免疫金银染色方法

彩色免疫金银染色方法（coloured IGSS,CIGSS）是由Frite和Hoenes等（1986）建立的一种新方法，刘彦仿等（1988）在《中华病理学杂志》上也报道了改进后的CIGSS方法。其基本原理是在IGSS法的基础上，根据洗彩色照片的显影原理而发展起来的，即IGSS后，在抗原位点处生成的银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的氧化反应，将银颗粒氧化成溴化银，后者与彩色显影剂起还原反应，生成金属银，而彩色显影剂本身则被氧化，其氧化产物使彩色成色剂由五色变成有色的染料，并沉积在银颗粒的部位，金属银变成了银离子。由于染料只能通过彩色显影剂沉积在有银的部位，不会发生非特异性背景染色。

一、操作步骤

（1）石蜡切片常规脱蜡至水。

（2）0.1%胰蛋白酶37℃消化20min,或抗原修复20min（98℃），自然冷却至室温。

（3）0.05mol/L（pH7,4）TBS洗3×3min.

（4）1%EA（卵蛋白）15min,不洗。

（5）适当稀释的特异抗体室温4h或4℃孵育20h,或37℃孵育1h.

（6）0.05mol/L（pH7.4）TBS洗3×5min.

（7）0.02mol/L（pH7.4）TBS（内含0.1%BSA）洗10min.

（8）1%EA 15min,不洗，1:10-1:20稀释的PAGlonm室温孵育1h,或37℃孵育30min.

（9）0.05mol/L（pH7.4）TBS洗10min.

（10）1%戊二醛洗10min.

（11）双蒸水洗5min.

（12）l%明胶洗5min.

（13）银避光显影（见银显影剂配方）8~15min

（14）双蒸水洗15min.

（15）固定：用显影定影液（1;4或1:10）固定5min,也可以用15%硫酸钠-20%硫代硫酸钠混合液固定1-3min,或用1%戊二醛固定5rain，温水洗3~6min.

（16）漂白：用2%铁氰化钾和1%溴化钾洗10min,双重蒸馏水洗5rain.

（17）彩色显影：用。-萘酚或菲尼酮或碱性品红显色2-4min,双重蒸馏水洗5~10min.

（18）固定：2%硫代硫酸钠和1%亚硫酸钠洗Stain.

（19）流水冲洗。

（20）缓冲甘油封片，观察。

二、CIGSS的优点

（1）阳性结果比黑色更鲜明。

（2）可以使弱信号得到进一步放大。

（3）可部分消除IGSS背景染色。

（4）信号/背景比值高。

（5）是开展IHC双重或多重标记的新途径。