石蜡切片模糊不清的原因探讨及补救措施
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1 原因及补救措施
组织的取材与固定: 取材, 应极力避免一些不规范的操作和随意性, 切勿挤、压、揉、扯,取材要新鲜, 不取已自溶或变形的组织, 如果组织固定不及时或是固定的时间过长过久, 都会使组织的构造受到损伤和影响, 从而对切片质量产生难以挽回的后果1适度脱水: 在组织脱水过程中, 时间掌握不好会造成组织细胞过分收缩, 或使组织难以进一步透明1切片时应注意的问题: 切片机的零件和螺丝松动, 以及切片时用力不均, 会造成切片厚薄不均, 切面不一致的现象1切片脱蜡: 在切片的脱蜡过程中, 脱蜡不彻底, 冲洗不干净, 以及脱蜡时切片已冷却, 蜡已凝固, 都将使染色困难或染色不均匀[ 1 ] 1染色时易出现的问题: 在染细胞核的时候,显蓝不足, 核的形态特点不清楚, 复染胞浆时变得模糊1分化不够时, 胞浆和基质也显蓝色, 模糊不清; 分化过度, 则蓝色过淡, 轮廓不清1在染伊红时, 过浓会掩盖了胞核的色彩, 太淡则胞质及纤维结构模糊1应以颜色对比鲜明、协调为原则1切片的脱水及透明: 由于脱水及透明不充分, 以及呼气和空气潮湿致使切片上有水分, 或是乙醇和二甲苯未能及时更换, 因纯度不够而造成切片发灰或呈水雾样1封固剂的掌握: 封固剂如果过稀或过少, 以及盖片小或不平, 盖片位置不当或被移动等, 也是原因之一1此外, 盖、载玻片要保持清洁, 最好使用前用清洁液浸泡烘干后再用, 以避免因玻片自身的污染而影响到观察结果[ 2 ] 1总之, 制作切片的每个环节及过程如稍有不慎和疏忽都会直接影响到切片的质量和效果, 而观察切片是否清晰透明, 染色对比是否鲜明, 是否有层次等, 都是判断切片质量优劣的重要指标1总之如能在以上过程掌握得当, 基本上就能制作出一张高质量的切片1为了弥补因失误而造成的遗憾, 我们采用了以下措施来解决, 取得了比较明显的效果, 其步骤如下: 首先, 将模糊的 切片经预热, 入二甲苯, 通过高、低浓度乙醇,再经自来水冲洗, 入1%盐酸酒精分化, 使切片退至无色1然后:
(1) 在苏木素液内加少许冰醋酸, pH值为215～3较好;
(2) 加酸后的苏木素液放入温箱内加温至40～50 ℃;
( 3) 切片浸泡
在40～50 ℃的温水中1min左右;
(4) 切片经苏木素染色5～10 min, 水洗;
(5) 1%盐酸酒精分化, (适当) 水洗;
( 6) 伊红染色5 min左右;
此文转载于《昆明医学院学报 》2006, ( 1) : 97～98 CN 53
作者：凌亚伟1) , 陈英杰2)
组织的取材与固定: 取材, 应极力避免一些不规范的操作和随意性, 切勿挤、压、揉、扯,取材要新鲜, 不取已自溶或变形的组织, 如果组织固定不及时或是固定的时间过长过久, 都会使组织的构造受到损伤和影响, 从而对切片质量产生难以挽回的后果1适度脱水: 在组织脱水过程中, 时间掌握不好会造成组织细胞过分收缩, 或使组织难以进一步透明1切片时应注意的问题: 切片机的零件和螺丝松动, 以及切片时用力不均, 会造成切片厚薄不均, 切面不一致的现象1切片脱蜡: 在切片的脱蜡过程中, 脱蜡不彻底, 冲洗不干净, 以及脱蜡时切片已冷却, 蜡已凝固, 都将使染色困难或染色不均匀[ 1 ] 1染色时易出现的问题: 在染细胞核的时候,显蓝不足, 核的形态特点不清楚, 复染胞浆时变得模糊1分化不够时, 胞浆和基质也显蓝色, 模糊不清; 分化过度, 则蓝色过淡, 轮廓不清1在染伊红时, 过浓会掩盖了胞核的色彩, 太淡则胞质及纤维结构模糊1应以颜色对比鲜明、协调为原则1切片的脱水及透明: 由于脱水及透明不充分, 以及呼气和空气潮湿致使切片上有水分, 或是乙醇和二甲苯未能及时更换, 因纯度不够而造成切片发灰或呈水雾样1封固剂的掌握: 封固剂如果过稀或过少, 以及盖片小或不平, 盖片位置不当或被移动等, 也是原因之一1此外, 盖、载玻片要保持清洁, 最好使用前用清洁液浸泡烘干后再用, 以避免因玻片自身的污染而影响到观察结果[ 2 ] 1总之, 制作切片的每个环节及过程如稍有不慎和疏忽都会直接影响到切片的质量和效果, 而观察切片是否清晰透明, 染色对比是否鲜明, 是否有层次等, 都是判断切片质量优劣的重要指标1总之如能在以上过程掌握得当, 基本上就能制作出一张高质量的切片1为了弥补因失误而造成的遗憾, 我们采用了以下措施来解决, 取得了比较明显的效果, 其步骤如下: 首先, 将模糊的 切片经预热, 入二甲苯, 通过高、低浓度乙醇,再经自来水冲洗, 入1%盐酸酒精分化, 使切片退至无色1然后:
(1) 在苏木素液内加少许冰醋酸, pH值为215～3较好;
(2) 加酸后的苏木素液放入温箱内加温至40～50 ℃;
( 3) 切片浸泡
在40～50 ℃的温水中1min左右;
(4) 切片经苏木素染色5～10 min, 水洗;
(5) 1%盐酸酒精分化, (适当) 水洗;
( 6) 伊红染色5 min左右;
此文转载于《昆明医学院学报 》2006, ( 1) : 97～98 CN 53
作者：凌亚伟1) , 陈英杰2)
