确定胶体金与待标记蛋白质用量
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一
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目测法
将待标记的蛋白质逐级稀释后，以5～40ug各取等体积顺序加入一系列装有lmL胶体金的试管中，另设一不加蛋白的对照管，混匀。5min后，再于上述各管中分别加入0.1mL10％NaCl溶液，混匀后，静置20min，观察结果。未加蛋白质和加入蛋白质的量不足以稳定胶体金的试管，呈现由红变蓝的聚沉现象，而加入蛋白质量达到最低稳定量的试管则保持红色不变。其中蛋白质最低的试管即含稳定lmL胶体金的必需蛋白质量。·在此基础上再加10％，即为稳定蛋白质的实际用量[设X＝加入蛋白质量，X十(XXl0％)＝每毫升胶体金需加蛋白量)，见图或加入BSA使其最终浓度为5％。
胶体金待标记蛋白质用量比例测定图标
用于测定颗粒直径为5nm的胶体金标记蛋白质的用量，测定时必须在每毫升金溶液中加入30％H 2 0 2 10mL，用0.lm01/LK 2 CO 3 调pH至待标记蛋白质的等电点，再加入蛋白质溶液(5-40/ag)和100ul 10％NaCl，5min后观察结果，不出现蓝色絮状物的试管即是足以稳定胶体金的蛋白质量。一般羊抗兔IgG适量为27ug/mL胶体金溶液，葡萄球菌A蛋白适量为15ug/mL胶体金溶液。
( 二 ) 光电比色法 免疫学实验技术论坛 http://bbs.bbioo.com/forum-140-1.html
制备一系列不同浓度的等体积蛋白质溶液(1m1)，分别加入5mL胶体金，迅速混匀，各加入lmL10％NaCl溶液，摇匀，静置5min后测各管OD值。根据胶体金颗粒大小，决定OD值波长，一般在520～580nm之间，测完后，绘制曲线图，以OD值为纵坐标，蛋白质用量为横纵标作一曲线，取曲线最先与横轴水免疫组织化学实验技术及应用平的那一点为蛋白质用量最稳定量。
图中10nm的胶体金溶液中蛋白质的最适稳定量为40ug/mL。表为用0.01％氯化金酸制备的每毫升金溶胶中，不同颗粒直径和吸收波长之间的关系，可知其每毫升胶体金溶液中所含胶体金颗粒数和吸收光波数值。
用0.01％氯化金酸制备的每毫升金溶胶中不同颗粒大小、颗粒数和它们吸收波长之间的关系
将待标记的蛋白质逐级稀释后，以5～40ug各取等体积顺序加入一系列装有lmL胶体金的试管中，另设一不加蛋白的对照管，混匀。5min后，再于上述各管中分别加入0.1mL10％NaCl溶液，混匀后，静置20min，观察结果。未加蛋白质和加入蛋白质的量不足以稳定胶体金的试管，呈现由红变蓝的聚沉现象，而加入蛋白质量达到最低稳定量的试管则保持红色不变。其中蛋白质最低的试管即含稳定lmL胶体金的必需蛋白质量。·在此基础上再加10％，即为稳定蛋白质的实际用量[设X＝加入蛋白质量，X十(XXl0％)＝每毫升胶体金需加蛋白量)，见图或加入BSA使其最终浓度为5％。
胶体金待标记蛋白质用量比例测定图标
用于测定颗粒直径为5nm的胶体金标记蛋白质的用量，测定时必须在每毫升金溶液中加入30％H 2 0 2 10mL，用0.lm01/LK 2 CO 3 调pH至待标记蛋白质的等电点，再加入蛋白质溶液(5-40/ag)和100ul 10％NaCl，5min后观察结果，不出现蓝色絮状物的试管即是足以稳定胶体金的蛋白质量。一般羊抗兔IgG适量为27ug/mL胶体金溶液，葡萄球菌A蛋白适量为15ug/mL胶体金溶液。
( 二 ) 光电比色法 免疫学实验技术论坛 http://bbs.bbioo.com/forum-140-1.html
制备一系列不同浓度的等体积蛋白质溶液(1m1)，分别加入5mL胶体金，迅速混匀，各加入lmL10％NaCl溶液，摇匀，静置5min后测各管OD值。根据胶体金颗粒大小，决定OD值波长，一般在520～580nm之间，测完后，绘制曲线图，以OD值为纵坐标，蛋白质用量为横纵标作一曲线，取曲线最先与横轴水免疫组织化学实验技术及应用平的那一点为蛋白质用量最稳定量。
图中10nm的胶体金溶液中蛋白质的最适稳定量为40ug/mL。表为用0.01％氯化金酸制备的每毫升金溶胶中，不同颗粒直径和吸收波长之间的关系，可知其每毫升胶体金溶液中所含胶体金颗粒数和吸收光波数值。
用0.01％氯化金酸制备的每毫升金溶胶中不同颗粒大小、颗粒数和它们吸收波长之间的关系
| 颗粒直径/nm | 颗粒数/个 | OD 520 | 颗粒数(OD 520 ＝1)/个 |
| 4.5 | 6.3×10 12 | 0.85 | 7.5×10 13 |
| 10.0 | 5.7×10 12 | 0.97 | 5.9×10 13 |
| 19.0 | 7.7× 10 1l | 1.1l | 7.0×10 11 |
| 30.0 | 2.0×10 10 | 1.18 | 1.7×10 11 |
| 41.5 | 8.0×10 10 | 1.12 | 7.2×10 10 |
