气相色谱法测定乙烯含量

乙烯（ethylene）是植物内源激素之一。以气体形式存在。准确测定乙烯释放量，对认识乙烯在植物抗逆生理、发育生理、开花生理中的作用有着重要的意义。

一、 原理：气相色谱具有灵敏度高，稳定性好等优点。色谱仪中的分离系统包括固定相和流动相。由于固定相和流动相对各种物质的吸附或溶解能力不同，因此各种物持的分配系数（或吸附能力）不一样。当含混合物的待测样（含乙烯的混合气）进入固定相以后，不断通以流动相（通常为N ₂ 或H ₂ ），待测物不断地再分配，最后，依照分配系数大小顺序依次被分离，并进入检测系统得到检测。检测信号的大小反映出物质含量的多少，在记录仪上就呈现色谱图。要使待测物得到充分的分离，就需要一种合适的固定相。乙烯往往与乙炔、乙烷难以分离，而采用GD×502作为固定相则可有比较满意的效果。

二、材料、 仪器 设备及试剂
（一）材料：水稻幼苗（或苹果、香蕉等）若干。
（二） 仪器 设备：1. 密封装置为带空心橡皮塞的三角瓶，或真空干燥器。2. 气相色谱仪。
（三） 试剂 ：标准乙烯。

三、实验步骤
1. 将试验材料进行不同的处理（如离体、伤害、发芽、黑暗、辐射、冷藏、催熟等），然后置于密封装置中若干时间。
2. 将色谱仪启动。启动步骤如下：（1）检测仪器各部件是否复位。若没有，需复位。（2）打开流动相（N ₂ ），将压力调至（5kg/cm ² ）。然后打开仪器上的N ₂ 阀，将流速调至25m/min（管道1，2一样）。（3）插上电源，打开仪器上电源开关。（4）调节柱温至60℃，将进样口温度调至100℃（乙烯为气体，进样口温度不需太高）。（5）打开点火装置电源及空气压缩机开关、调节适当的量程和衰减（range and attenuation）（关机时，量程应打至1，衰减为∞）。（6）打开钢瓶氢气阀，调压力为1.0kg/cm ² ）（两管道一样），同时将空气压力调至0.5kg/cm ² 。打开记录仪电源，并选择10mV的输出电压和适当的走纸速度（10nm/min）。（7）点火：空气和氢气调好后，将选择键打到ON位置。按点火键10S左右，氢气既可在燃烧室燃烧，在点火并点着时，可以看到记录笔向上移动。（8）条件选择：将选择键打到2，并将空气压力调至1.0kg/cm ² ，氢气调至0.5～0.7kg/cm ² 之间（两管道一样）。待基线稳定后即可正式测定。
3. 测定（1）取一定浓度（μl/L，以N ₂ 作为稀释剂），一定量（100～1000μl）的标准乙烯进样，并注意出峰时间。待乙烯峰至顶端时即为乙烯的保留时间，重复3～4次，得到平均值。该平均值即作为样品中乙烯定性的依据之一。（2）取同样量的待测样品，注入色谱柱（进样）。待样品峰全部出完后，即可做下一个样品。（3）定性：A.外标法定性：样品中与标准乙烯保留时间相同的峰，即为样品乙烯峰。B.内标法定性：在得到某一样品的色谱图后，向该样品中加入一定量的标准乙烯进样，若某峰增高，该峰即为样品中乙烯峰。4.待得到所有样品色谱图后，可关机，关机步骤：（1）关掉氢气总阀或氮气总阀。（2）关掉空气压缩机。（3）将量程或衰减复位，选择键打到OFF。（4）关掉记录仪。（5）待H ₂ 、N ₂ 全部排完后，将所有阀复位。（6）关主机电源，并拔下插头。
四、结果计算
样品中乙烯浓度（μl/L）＝样品峰高×标样浓度/标准峰高
样品乙烯生成速率（μl/g/h）＝乙烯浓度（μl/L）×容器体积（L）/[密封时间（h）×样品重量（g）]