磷硫铁法测定血清胆固醇

一、实验目的
1.掌握磷硫铁法测定血清胆固醇的原理与方法。
2.深入了解血清胆固醇的性质及其在体内的代谢。

二、实验原理
血清经无水甲醇处理后蛋白质被沉淀，胆固醇则溶解在无水甲醇中。甲醇提取液与硫磷铁试剂反应后生成有色物质，其呈色度与胆固醇含量成正比，可于550nm 波长下进行比色测定。正常血清中胆固醇的含量有随年龄增大而增加的趋势，其平均正常值在l10～220mg/100mL。

三、 仪器 和试剂
仪器
722分光光度计、台式离心机、具塞锥形瓶等。
试剂
1．1.0mg/mL 胆固醇贮存液：将100.0mg 胆固醇溶于100mL 无水甲醇中。
2. 0.02mg/mL 胆固醇工作掖：取2mL 胆固醇贮存液加98mL 无水甲醇。
3. 三氯化铁溶液：5.0g FeCl ₃ ·6H ₂ O 溶于200mL 浓磷酸中。
4. 磷硫铁 试剂 (P-S-Fe 试剂)：取40mL 的三氯化铁溶液用浓硫酸定容到500mL。

四、操作步骤
1.取两支带帽试管，各加入0.1mL 血清和10mL 无水甲醇，立即用力振荡(或Vortex mixer 上混10s)。
2.将两支试管于台式 离心机 上高速(3000rpnI)离心5min。各取2.0mL 上清液转移到相应的锥形瓶
中。
3.取0.02mg/mL 胆固醇工作液2.0mL 转移到第三个锥形瓶中，用作标准。
4.取2.0mL 甲醇加入到第四个锥形瓶中，用做空白。
5.向4个锥形瓶中缓慢加入2.0mL 的磷硫铁试剂，轻轻振荡均匀。
6.封住锥形瓶口，置室温30min，所生颜色在1h 内稳定。
7.将上述各锥瓶中的有色溶液于550nm 下进行比色测定，作记录。.

五、计算