二乙酰-肟法测定血清尿素氮实验

在酸性反应环境中加热，尿素与二乙酰缩合，生成色素原二  嗪，称为Feorin反应，因为二乙酰不稳定，故通常由反应系统中二乙酰-肟与强酸作用，产生二乙酰，二乙酰与尿素反应，综合生成红色的二嗪，其颜色的深浅与血清中尿素含量成正比。

一、 实验试剂：

l. 碱性试剂：在三角烧瓶中加蒸馏水约100ml，然后加入浓硫酸44ml及85%H3PO466ml冷至室温，加入硫氨脲50mg及硫酸镉2g溶解后加蒸馏水稀释至1升，置棕色瓶放冰箱保存，可稳定半年。

2. 二乙酰-肟溶液：称取二乙酰-肟20g，加蒸馏水约900ml溶解后，再用蒸馏水稀释至1升置棕色瓶中，贮存放于冰箱内可保存半年不变。

3. 尿素标准贮存液（100mmol/L）：称取干燥纯尿素（MW=60.06）0.6g，溶解于水中并稀释至100毫升，加0.1g叠氮钠防腐，置冰箱内稳定六个月。

4. 尿素标准应用液（5mmol/L）：取5.0ml贮存液用去氨蒸馏水稀释至100ml。

二、实验操作：

三、计算：

血清尿素氮 mmol/L=（测定管吸光度／标准管吸光度）×5

血清尿素氮 mmol/L= 尿素mmol/L×28

参考值：2.86--8.2 mmol/L尿素

l. 如果血清或血浆尿素氮超过400mmol/L时，则必须将标本用生理盐水稀释后再测定，结果乘以稀释倍数报告之。

2. 微量吸管需要校正，吸管保持清洁干燥，加入样本后显色剂沿试管壁加入。

3. 试剂中加入硫氨脲和硫酸镉，增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象（每小时＜5％），加热显色冷却后，应及时比色。

4. 尿液中尿素也可用此法进行测定，由于尿液中尿素含量高，标本应用蒸馏水作l：50倍稀释，如果显色后吸光度仍超过本法的线性范围，还需将稀释尿液再重稀释，重新测定。