蛋白质的定量测定方法：紫外吸收法

【 实验目的 】
1. 学习紫外吸收法测定蛋白质含量的原理。
2. 掌握紫外分光光度计的操作方法。
【实验原理】
大多数蛋白质分子结构中含有芳香族氨基酸（酪氨酸和色氨酸）残基，使蛋白质在280nm的紫外光区产生最大吸收，并且这一波长范围内的吸收值与蛋白质浓度的成正比，利用这一特性可定量测定蛋白质的含量。
紫外吸收法可测定0.1-0.5mg/ml的蛋白质溶液，此操作简便，测定迅速，不消耗样品，低浓度盐类不干扰测定。因此，此法在蛋白质的制备中广泛应用。
【实验材料】
1. 实验器材
试管及试管架；50毫升容量瓶  2只；移液管；紫外分光光度计。
2. 实验 试剂
(1)标准蛋白质溶液：精确配制2mg／ml的酪蛋白溶液。
(2)样品溶液：配制约0.5mg/ml的酪蛋白溶液作为未知样品溶液。
【 实验操作 】
1. 绘制标准曲线
取7支试管按下列各表加入各 试剂 ：

管号 试剂	0	1	2	3	4	5	6
标准蛋白质溶液(ml)	0.0	0.5	1.0	1.5	2.0	2.5	3.0
蒸馏 水(ml)	8.0	7.5	7.0	6.5	6.0	5.5	5.0
蛋白质浓度(mg/ml)	0.000	0.125	0.250	0.375	0.500	0.625	0.750

试剂加完后摇匀，在紫外分光光度计上，于280nm处以0号管为对照，分别测定各管溶液的光密度值。以光密度为纵座标，标准蛋白溶液浓度为横座标，绘制出标准曲线。
2. 测定未知样品
取样品溶液4毫升,加 蒸馏 水4ml混匀，在280nm下测定其光密度值。  
【实验结果】
根据样品溶液的光密度值，在绘制好的标准曲线图中查出样品溶液的蛋白质含量。