转印后切取印迹膜
互联网
1025
转印后切取印迹膜
有时转印后需将印迹剪成较小的片状进行单独处理。单个泳道可以泳动同一样品，待彼此分开后，可用不同的抗体并列检测。如以电泳方向剪膜，就可在同一样品中检测不同分子大小的抗原。为了简便而精确地找到泳道，电泳之后用丽春红S（Ponceaus S）或印度墨汁对印迹膜进行染色，便可很快确定待测蛋白质的位置并将其剪下。表表明两种染料的的适用范围及优缺点，用丽春红S染色的优点是操作简便，价廉和具有可逆性，在封闭过程中，染色易消褪，且不干扰进一步的检测。
在某些情况下，可能想用印迹中的较高分子量区域来检测一种抗原，用另一个区域来检测另一不同分子量的蛋白质。为了使印迹中不同的区域正好对应于相应分子量的范围，这需要在对照泳道中加入已知分子量的蛋白质。这样可方便地在印迹中找到适当的区域并将其剪下。
使用预染的分子量标记，可为转印后切下所需印迹提供良好的指示，此类标记已商品化，但是比丽春红S染色法昂贵。标记中的颜色除了增加成本对实验并无不良影响，而且在泳动时非常漂亮。
用于免疫印迹染色的染料
|
染料
|
优点
|
缺点
|
|
丽春红S
|
便宜
|
不够灵敏
|
|
|
适合于所有的抗原检测方法
|
不持久
|
|
|
|
|
|
印度墨汁
|
便宜
|
酶检测需用吐温封闭
|
|
|
灵敏
|
先检测，后染色
|
|
|
适合于放射性标记检测
|
不适合于化学发光和生色底物的酶检测方法
|
