荧光原位杂交(FISH)
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荧光原位杂交 (FISH)
许多疾病 相关基因的突变涉及染色体的畸变，如脆性X病、杜氏肌营养不良以及绝大多数的恶性肿瘤。这些畸变可以用细胞遗传学的方法检测出来。肿瘤细胞一般多有非随机的染色体片段丢失或扩增，而更多的疾病则只是发生一些细胞遗传学上不可见的变异，如点突变、微小插入或缺失等。在许多情况下，这种变异会导致病理性表型的出现。这种情况一般是染色体的畸变破坏了畸变染色体片段内或及其邻近基因的完整性，使得该基因不能正常转录得到完整的功能性mRNA，或是基因的缺失，或是染色体畸变虽不影响基因的表达产物，但基因本身的编码区被染色体的异位或倒位所改变而导致基因过多或过少的表达。许多抑癌基因的失活就是由于染色体的变异使得抑癌基因缺失或突变失活所致，原癌基因则因扩增、突变或易位而激活。
针对染色体畸变，目前已开发出了许多种方法和技术，典型的几种方法包括荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization，FISH)、比较基因组杂交(comparative genome hybridization，CGH)、杂合子缺失技术等。
FISH是利用DNA探针在高分辨率中期或间期染色体上杂交从而定位探针位置和检验染色体异常的方法。利用其不同颜色的标记可以同时显示多个位点，更容易鉴定多个位点之间的关系。使用FISH可以对许多染色体异常进行高灵敏度的检测，如染色体的易位、倒位、扩增或缺失等。
FISH的原理是：首先用生物素或地高辛标记的dNTP标记目的探针，再以此探针与中期或间期的染色体变性解链后杂交，经进一步洗脱，加入罗丹明、FITC或CY3等荧光染料标记的生物素或地高辛的抗体，经洗去多余的抗体，就可以在荧光显微镜下观测信号。亦可利用数码相机，对信号进行定量分析。
