ArrayStar转录因子活性ELISA检测法
互联网
2216
ArrayStar 转录因子活性 ELISA 检测法
ArrayStarTM转录因子活性ELISA 试剂盒可以快速、灵敏地检测细胞核提取物中转录因子的DNA结合活性。试剂盒采用96微孔板，标记探针是生物素标记的双链寡核甘酸片段，含有转录因子的特异性DNA 结合序列。当标记探针与细胞核抽提物一起孵育时，核抽提物中活性形式的转录因子与探针特异性结合，形成转录因子／探针复合物。随后，转录因子／探针复合物与链亲和素包被的微孔板孵育，转录因子／探针复合物通过与微孔板上链亲和素结合，被固定在微孔板上。洗去未结合物，加入特异性一抗，然后加入HRP标记的二抗及底物，HRP催化底物发生颜色改变，根据颜色深浅即可检测转录因子活性改变。转录因子活性ELISA方法是建立在ELISA基础上的高灵敏度的检测方法，也用于检测哺乳动物组织或细胞中转录因子的DNA结合活性，比传统凝胶迁移实验(EMSA)的灵敏度高10倍，在5h内就能完成。不涉及放射性和凝胶电泳，安全简便，而且这种微孔板的形式能同时检测1―96个样品。
1．ArrayStarTM转录因子活性ELISA检测特点
(1)灵敏度比凝胶迁移实验(EMSA)高10倍。转录因子水平小的变化就能对细胞功能产生极大的影响，因此，在研究转录因子时采用灵敏的方法是非常重要的。
(2)特异性强。为了保证转录因子特异与生物素标记探针DNA结合，试剂盒提供了未标记寡核苷酸片段(含有与标记探针相同的转录因子结合位点)。此片段能够与探针竞争结合转录因子，减弱信号强度。突变型的未标记寡核苷酸片段则不能与标记探针竞争结合转录因子改变信号强度。此外，抗转录因子一抗特异与转录因子结合，与其他蛋白无交叉反应，确保试剂盒的特异性。
(3)快速。EMSA需要凝胶电泳，操作费时又不方便。使用转录因子活性ELISA检测试剂盒，能够在5h内得到结果。
(4)方便、安全。不涉及放射性，不用电泳。
(5)可同时检测1～96个样品。
(6)能够检测组织及细胞样品。
2．转录因子ELISA实验步骤(图2―10)
转录因子活性ELISA流程图
(1)核蛋白抽提物中转录因子与生物素标记探针结合形成转录因子／探针复合物。
(2)转录因子／探针复合物与微孔板上链亲和素结合固定在微孔板上。
(3)抗转录因子一抗与转录因子结合。
(4)HRP酶标二抗与一抗结合。
(5)HRP作用于底物发生颜色改变，颜色深浅与转录因子DNA结合活性成正比。
