免疫电镜技术组织的取材与固定

免疫电镜技术组织的取材与固定

 

    免疫电镜技术是根据抗原与抗体特异性结合的原理，利用高电子密度的标记物标记抗体或用经免疫组织化学反应能产生高电子密度产物的标记抗体，在超微结构水平对抗原进行定性、定位的技术方法。Singer于1959年首先建立了用电子密度较高的铁蛋白(ferritin)标记抗体的方法，可对细胞表面抗原进行超微结构定位。该技术为免疫 电镜技术的发展奠定了基础。Nakane与Pierce于1968年成功建立了免疫酶标记电镜技术，使细胞内抗原的超微结构定位成为可能。Faulk和Taylor于1971年提出用胶体金(colloidalgold)标记抗体，并首先用于免疫电镜研究，由此大大促进了免疫电镜技术的发展。

 

    免疫 电镜技术的取材要求更迅速更精细。与电镜酶细胞化学标本制备相似，既要求保存良好的细胞超微结构，同时又要保持组织细胞的抗原性，但是，两者间往往处于矛盾之中，也就是说，强固定剂虽有利于超微结构的保存，但易导致抗原性明显减弱，所以免疫电镜的组织标本固定不仅要考虑超微结构的保存，亦应尽力保持其抗原性，故应选用较温和的固定剂。常用固定剂有过碘酸―赖氨酸―多聚甲醛(periodate-lysine-paraformaldehyde，PLP)液和2％多聚甲醛―0．5％戊二醛混合液。在包埋前染色中，PLP较为常用，该固定液较适用于含糖类丰富的组织，对超微结构及许多抗原活性保存较好。因为PLP中的过碘酸能氧化糖类，使其中的羟基转变为醛基，赖氨酸的双价氨基与醛基结合从而把抗原交联起来。因组织抗原绝大多数含蛋白质和糖类。而抗原表位一般位于蛋白部分。PLP能选择性地使糖类交联，这样既稳定了抗原，又不影响抗原表位与抗体的结合。加入低浓度的多聚甲醛则能稳定蛋白与脂类。但赖氨酸较贵，而多聚甲醛／戊二醛固定液相对经济简便，效果也较理想。

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