酶标记免疫电镜技术

（一）在酶标记免疫电镜检查中较常碰到的非特异性染色及其清除方法：

1. 基底染色：某些组织、细胞常带正电荷，而抗体分子则带负电荷。由于静电吸引作用，在组织和细胞中会出现非特异性抗原所在部位的抗原抗体复合物，造成非特异性染色，称为基底染色。最易造成基底染色的有胶原纤维、结缔组织和变性坏死的细胞等。

防止出现基底染色的方法是在用第一抗体孵育前，先用20%制备第二抗体的同种动物正常血清或2%牛血清白蛋白溶液对待检的组织或细胞孵育30 min。这样可明显地减少基底染色。用于封闭非特异性吸附的血清必须无溶血现象，否则，红细胞内的血红蛋白等可与过氧化物酶的底物发生显色反应而出现假阳性。此外，若所用的抗体纯度较低、浓度偏低、每步操作后洗涤不足、加底物溶液后反应时间过长等都可导致或加深基底染色。

2. 内源性过氧化物酶：最常因内源性过氧化物酶而引起假阳性检查结果的是血红蛋白。此外，中性粒细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞等都含有过氧化物酶，亦可造成检查结果假阳性。于检查前除去细胞中过氧化物酶类的方法是：①用 1%H₂O₂ 处理待检标本 30 min ②用新鲜配制的 0.5%过氧化氢甲醇溶液处理15分钟；③用 0.01%过碳酸溶液处理 10 min, 再加 0.01% 绷氢化钠水溶液处理 10分钟，以除去过碳酸产生的醛类；④在二氨基联苯胺底物－过氧化氢溶液中加入叠氮钠 (NaN₃) 溶液，最终浓度为 0.005mol/L 。

3. 内源性生物素：在组织标本中可存在生物素，做生物素－亲合素免疫染色时，可产生非特异性染色。解决的办法是于检查前先用 2-甲基-D-甘露糖背钝化组织中的生物素，使它们失去生物学活性。

（二）酶标免疫染色特异性对照观察

如同其他实验室检查项目一样，为了提高免疫透射电镜检查的特异性和准确性，必须作一些检查对照。

1. 阴性对照： ①检抗原或抗体的阴性对照：用肯定不含待检抗原或抗体的组织、细胞等标本进行免疫透射电镜检查，结果必须阴性；②无任何抗体的阴性对照：在整个免疫透射电镜的检查操作中，不加入任何抗体，结果应为阴性。若仍为阳性，则多因非特异性吸附、存在内源过氧化物酶或生物素所致；③同种动物正常血清的阴性对照：在免疫透射电镜检查操作中，用制备抗体的同种动物正常血清代替抗体，结果应为阴性。

2. 阳性对照：在免疫透射电镜检查操作中，加人待检的特异性抗原或抗体，结果必须阳性。