简介
灌流后或不经过灌流的小鼠均可用于分离目标器官或组织。需要称重比较的组织，如心脏、脂肪、肝脏等，一般不经过灌流，保证组织的原始体积和重量，取材时应尽量完整而不黏附其他组织如心脏周围结缔组织，在冰冷的 PBS 中漂洗去掉组织上的多余血液或血块，在吸水纸上吸干多余水分后称量。固定时根据实际需要选择合适的固定液，比较常用的是溶解于 PBS 的 4％ PFA 或 10％ 中性甲醛，需要注意的是不同组织有不同的取样固定方式。
材料与仪器
器材：解剖工具、10 ml 注射器
试剂：固定液
步骤
组织分离及固定的基本过程可分为如下几步：
（一）组织分离
A. 从腹部下方剪开一个小口，向上撕开直到颈部。
B. 向上剪开颌部软骨，用镊子夹住舌头，向下仔细剪开组织靠背侧的连接，完整地取得从舌头到膈肌部分的所有组织，包括肺、心脏、胸腺、气管、食管及附着在气管两侧的甲状腺等。
C. 打开腹腔，从生殖器出口开始，向上分离整个生殖系统，对于雌性该过程比较简单，雄性需仔细分离附睾及输精管与性腺脂肪的粘连，并保持形态完整。
D. 分离整个肝脏和胃右侧的脾脏。
E. 向下剪开生殖口下方的骨头，从肛门开始向上分离整个消化道，用 10 ml 注射器从结肠末端打入固定液约 5 ml，至整个肠道及胃部被固定液充盈。
F. 分离背侧的肾脏（一枚或一对），从股部分离淋巴结，并剪取部分皮肤，雌性应包含乳腺。
G. 将小鼠从解剖台上取下翻转，用镊子取出连接部分视神经的眼球，剪开头部皮肤，将颈部及嗅球前骨组织分别剪断，从侧面剪断头盖骨下缘所有组织，将头盖骨向前整体翻开，取出完整的脑组织固定。（图 8-2-2）为小鼠全身分离组织顺序示意图。
（二）固定
不同组织有不同的取样固定方式，如肠道组织即有：
①立刻解剖打开肠腔清洗后固定；
②打入一定剂量的固定液固定后进行处理两种固定方式，根据需要进行选择。
注意事项
1. 如果需要拍照，不同小鼠的相同组织应以相同方式平行放置在对比度高的背景下，如纯白或纯黑背景，拍照应从水平正上方进行，尽量包含所有组织及标尺。小组织应该完全浸没在冰冷的 PBS 中，同样将所有需要比较的组织平行放置在同一视野中，在体式镜下以合适的放大倍数拍照，避免反光干扰。
2. 全身所有组织分离步骤：除了分离少量目标组织外，对表型不明确的小鼠通常需要对所有常规组织进行全面的组织学分析，因此应使用简便而固定的组织分离流程进行操作。
3. 使用超过组织体积 20 倍的固定液，一般固定过夜即可，部分组织如脑或骨组织可适当延长固定时间。经过固定的组织使用 PBS 漂洗后，用锋利的刀片切成大小合适的组织块，然后用于冷冻或石蜡脱水包埋。
来源：丁香实验
