质体快速检定法

这个方法是以phenol 及chloroform 溶菌后直接进行电泳分析，并未将质体DNA与宿主细菌染色体DNA 分离，得到的DNA 也不能用限制酶作用。但因其快速简便，所以可藉的于短时间内检定大量转形株中质体DNA 的相对分子量，以初步筛选带有重组质体的转形株。

药品试剂：

LB/Amp plates （LB plate 添加100 μg/mL ampicillin）

1×NET （20 mM Tris-HCl; 150 mM NaCl; 0.1 mM EDTA, pH 8.0）

PCI （25:24:1）

RNase A （1 mg/mL）

1% agarose gel

方法步骤：

1） 由前一天转形所得的转形株中，挑选12~24 个单一菌落，在LB/Amp plate上划数道短的横线或斜线，同时也须要接种带有载体pQE31 的菌株，于37℃培养过夜或直至菌体长出。

2） 以接种环将菌体刮下，悬浊在30 μL 1×NET 中，震荡混合均匀。

◆ 不要忘了pQE31/JM109!

3） 加入30 μL PCI,剧烈震荡。

4） 以12,000 rpm 离心3 min （室温）。

5） 将上层液吸至另一支干净离心管，加1 μL RNase A 及3 μL 10×追踪染剂，以50 V 进行电泳分析。 由于样品中有细菌染色体DNA,所以在加入样品槽时需十分小心，否则DNA 极易流失在电泳缓冲液中。 电泳后，可由质体DNA 的泳动率知其相对分子量大小。

6） 选取带有质体分子量大于pQE31 的菌落，接种于3 mL LB/Amp 液体培养基，于37℃震荡培养过夜，以抽取质体，进行限制酶分析。