简介
卵泡刺激素生物检定法是使用卵泡刺激素供试品处理实验动物，后续用以观察动物在供试品处理后的生命状态，并与注射标准品的动物进行比对。从而推断供试品毒力是否符合规定的实验方法。
材料与仪器
试剂
① 生理盐水；
② 牛血清白蛋白生理盐水；
③ 氢氧化钠溶液；
④ 标准品溶液；
⑤ 供试品溶液。
实验动物：
① 日龄 19~23 天，体重 36~ 50 g 清洁级雌幼大鼠。
步骤
卵泡刺激素生物检定法的基本过程可分为如下几步：
A. 生理盐水的配制。
称取氯化钠适量，加水配成 0.9% 的溶液。
B. 牛血清白蛋白生理盐水配制。
称取牛血清白蛋白适量, 加入到生理盐水中，配成 1 mg/mL 的牛血清白蛋白溶液，加入 1 mol/L 氢氧化钠溶液调节 pH 至 7.2±0.2。
C. 氢氧化钠溶液的配制。
称取氢氧化钠适量，加水配成 1 mol/L 氢氧化钠溶液。
D. 标准品溶液配制。
(1) 取尿促性素标准品，放置至室温。
(2) 割开安瓿（注意勿使内容物损失）立即用溶媒将内容物洗出按 FSH 的标示效价配成 10 IU/mL 或 20 IU/mL 标准品溶液，河直接配成相当于剂量 ds3 浓度的溶液。
E. 标准品溶液的稀释。
(1) 根据动物品系、来源、季节，按《中国药典》附录卵泡刺激素生物鉴定法的要求，选择标准品高、中、低 3 组剂量。
(2) 一般高剂量为 2~4 U/mL，剂距 (r) 不得大于 1:0.5。分别精密量取 10 IU/mL 或 20 IU/mL 标准品溶液。适量，各精密加入一定量溶媒，配制成高、中、低三组标准品稀释液。
(3) 稀释液至 4~8 °C 保存，供 3 日内使用。
F. 供试品溶液配制。
(1) 按供试品 FSH 的标示效价或估计效价，同标准品溶液的配制。
(2) 粉末放置至室温，迅速精密称取适量。将称得的毫克数乘以标示单位数或估计效价，得总单位数用溶媒配成 10 IU/mL 或 20 IU/mL 的供试品溶液，河直接配成相当于剂量 dT3 浓度的溶液。
(3) 注射用粉针按标准品溶液配制方法操作供试品溶液的稀释、保存、使用同标准品溶液。
G. 动物选择：取同一品系，19~23 日龄， 体重 36~50 g 清洁级雌幼大鼠；其出生日期相差不得超过 3 日，体重相差不得超过 10 g。
H. 动物处置。
(1) 分组：按体重将大鼠随机分组，每组不得少于 8 只动物。
(2) 注射：按组分别给予标准品或供试品 3 种浓度稀释液，毓大鼠皮下注射 0.5 mL。每天 1 次，连续 3 天，每天应安排在相同的时间内注射或 3 次注射的间隔时间（约 22 小时）应相同。
(3) 摘取卵巢：最后一次注射后 24 小时，处死大鼠。将死亡的大鼠仰卧固定手术板上，开腹肌，推开肠管暴露卵巢，将双侧卵巢剪下取出，把卵巢置于胜理盐水湿润的滤纸上，剥离附着的脂肪组织，并去除输卵管，用滤纸片吸去附着的水分，立即称重，并记录在与体重相对应的栏中。
注意事项
A. FSH 法的可靠性测验应为剂间、回归变异非常显著，偏离平行、二次曲线、反向二次曲线不显著，否则实验结果不成立，对实验结果不成立者应做以下检查：
(1) 检查实验操作包括溶液配制、注射、实验动物的饲养等是否符合要求。
(2) 剂间、回归不显著，S、T 或 U 的反应不在对数剂量反应直线范围内，应根据反应结果重新调整剂复试。
B. 可靠性测验通过，实验结果成立。若供试品间变异显著时，可根据 S 和 T 各剂量组的反应情况调整剂量以减小实验误差：
(1) T 或 U 各剂量组反应值明显低于高于 S 剂量组时，可调低 T 或 U 的剂量，或提高 T 或 U 的估计效价。
(2) T 或 U 各剂量组反应值明显低于低于 S 剂量组时，可调高 T 或 U 的剂量，或降低 T 或 U 的估计效价。
B. 实验误差 (FL%) 的判断按药典规定，FL% 超过者，可做以下处理：
(1) 检查实验操作和动物饲养管理等是否符合要求。
(2) 重复实验。
(3) 按规定将几次实验结果合并计算，求得合并计算的效价及实验误差应符合规定。
来源：丁香实验
