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升压素生物测定法

相关实验:激素生物测定法检定药品生物制品成品实验

最新修订时间:

简介

升压素生物测定法是使用升压素供试品处理实验动物,后续用以观察动物在供试品处理后的生命状态,并与注射标准品的动物进行比对。从而推断供试品毒力是否符合规定的实验方法。

材料与仪器

试剂:

① 标准品溶液;

② 标准品稀释液;

③ 供试品溶液。

实验动物:


① 体重 300 g 以上的清洁级雄性大鼠。

步骤

升压素生物测定法的基本过程可分为如下几步:


A. 标准品溶液的配制。


(1) 迅速精密称取垂体后叶标准品适量,避免吸潮。


(2) 加少量 0.25% 醋酸溶液,仔细研磨,移置硬质大试管中。


(3) 精密加入 0.25% 醋酸溶液使成每 1 mL 中含升压素 1U 的溶液,管口轻放一玻璃塞,浸入沸水浴中,时时振摇,加热(煮沸)5 分钟取出,迅速冷却,滤过。


(4) 滤液分装于适宜的容器中,4~8 °C 贮藏,如无沉淀析出,可在 3 个月内使用。


B. 标准品稀释液的配制。


(1) 试验当日,精密量取标准品溶液适量。


(2) 加氯化钠注射液制成两种浓度的稀释液,高、低剂量的比值(r)一般不得大于 1:0.6,调节剂量使低剂量能引起血压升高,剂量应不致使血压升高达到极限。


C. 供试品溶液与稀释液的配制。


(1) 按供试品的标示量或估计效价 (A< [T] >),参照标准品溶液与稀释液的配制法配成两种浓度的稀释液,期值(r)应与标准品相等。


(2) 标准品与供试品高、低剂量所致的反应均值应相近。


D. 动物选择。取体重 300 g 以上的清洁级成年雄性大鼠。


E. 动物处置。


(1) 麻醉:用适宜的麻醉剂(如腹腔注射乌拉坦 1 g/kg)麻醉后,固定于保温手术台上,分离气管,必要时插入气管插管,以使呼吸畅通。


(2) 静脉插管:在一侧颈静脉或股静脉插入静脉插管,供注射药液用,按每 100 g 体重注入肝素溶液 50~100 U。


(3) 动脉插管:然后剥离另一侧颈动脉,插入与血压计相连的动脉插管,在血压计与插管通路中充满氯化钠注射液,并于动脉插管中注入适量肝素 (200~400 U) 抗凝。


(4) 记录血压:全部手术完毕后,将血压计调节到与动物血压相当的高度,启动脉夹,记录血压。


F. 注射


(1) 缓慢注入适宜的交感神经阻断药(如酚妥拉明),按大鼠每 100 g 体重注入 0.1 mg,每隔 5~10 分钟用相同剂量再注射一次。


(2) 待血压稳定后,即可进行药液注射,各次药液的注射速度应基本相同,并于每次注射后立即注入氯化钠注射液 0.3~0.5 mL。


(3) 每次注射应在前一次注射的反应基本稳定以后进行,相邻两次注射的间隔时间应相同(10~15 分钟。


(4) 标准品稀释液和供试品稀释液各取高、低两个剂量 (ds< [1] >、ds< [2] >, dT< [1] >、dT< [2] >) 为一组,按随机区组设计的次序轮流注入,每组 4 个剂量,复 4~ 6 组。

注意事项

A. 测量路剂量所致血压升高的高度,照生物检定统计法中的量反应平行线测定法计算效价及实验误差。

B. 本法的可信限率 FL (%) 不得大于 20%。

来源:丁香实验

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