简介
生长激素生物测定法(大鼠体重法)是使用生长激素供试品处理实验动物,后续用以观察动物在供试品处理后的生命状态,并与注射标准品的动物进行比对。从而推断供试品毒力是否符合规定的实验方法。
材料与仪器
试剂
① 标准品溶液;
② 供试品溶液。
实验动物:
① 日龄 26~28 天,体重 60~80 g 清洁级雌性大鼠 (同性别)。
步骤
生长激素生物测定法(大鼠体重法)的基本过程可分为如下几步:
A. 标准品溶液的配制。
(1) 试验当日,取标准品,按标示效价用含 0.1% 牛血清白蛋白的 0.9% 氯化钠溶液,配制成高、低两种浓度的标准品溶液。
(2) 一般高浓度标准品溶液配成每 1 mL 含 0.1 ~0.2 U,低浓度标准品溶液配成每 1 mL 含 0.025~0.05 U,高、低两浓度比值(r)一般为 1:0.25。
(3) 标准品溶液分装成每天剂量并密封于 -15 °C 以下保存。
B. 供试品溶液的配制。
按供试品的标示效价或估计效价(AT,参照标准品溶液的配制及保存方法配制和保存。
C. 动物选择。取同一品系,相同性别,26~28 日龄,体重 60~80 g 的清洁级大鼠 32 只。
D. 动物处置。
(1) 摘除垂体:试验前 2~3 周手术摘除垂体,手术后于清洁级以上动物室饲养使其恢复。
(2) 称重分组:取去垂体手术后 2~3 周,体重变化小于手术前 ± 10% 的大鼠,按体重均匀分成 4 组,每组至少 8 只,织编号并记录体重。
E. 注射分别自颈部皮下注射一种浓度的标准品溶液或供试品溶液 0.5 mL,每日 1 次,连续 6 日。
F. 尸检在最后一次给药后 24 小时,处死大鼠,称重,必要时实验结束后可进行尸检,切开蝶鞍区,肉眼检查有无垂体残留,剔除有垂体残存的大鼠。
注意事项
A. 每只动物给药后体重增加的克数作为反应值。
B. 供试品与标准品各剂量组所致反应的平均值应相当,低剂量组应较正常动物体重有明显的增加,剂量组体重增加不致达极限。
C. 参照生物检定统计法中的反应平行线测定法计算效价及实验误差。本法信限奉 FL (%) 不得大 50%。
来源:丁香实验