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升压物质检查法

相关实验:激素生物测定法检定药品生物制品成品实验

最新修订时间:

简介

升压物质生物测定法是使用升压物质供试品处理实验动物,后续用以观察动物在供试品处理后的生命状态,并与注射标准品的动物进行比对。从而推断供试品毒力是否符合规定的实验方法。

材料与仪器

试剂:

① 标准品溶液;

② 标准品稀释液;

③ 供试品溶液。

实验动物:


① 体重 300 g 以上的清洁级雄性大鼠。

步骤

升压物质生物测定法的基本过程可分为如下几步:

A. 标准品溶液的配制。

(1) 参照缩宫素生物测定法标准品溶液的配制法,按垂体后叶标准品升压素单位计算,配成每 1 mL 中含 1 U 的溶液。

(2) 分装于适宜的容器内,4~8 °C 贮存,如无沉淀析出,可在 3 个月内使用。

B. 标准品桥释液的配制。

临用前,精密量取标准品溶液适量, 用氯化钢注射液配成每 1 mL 中含 0.1 U 的稀释液。

C. 供试品溶液的配制按品种项下规定的限量,配成适当浓度的供试品溶液;试验时,供试品溶液与标准品稀释液的注入体积应相等。

D. 动物选择。取体重 300 g 以上的清洁级成年雄性大鼠。

E. 动物处置。

(1) 麻醉:用适宜的麻醉剂(如腹腔注射乌拉坦 1 g/kg)麻醉后,固定于保温手术台上,分离气管,必要时插入插管,以使呼吸通畅。

(2) 静脉插管:在一侧颈静脉或股静脉插入静脉插管 ,供注射药液用,按每 100 g 体重注入肝素溶液 50~100 U。

(3) 动脉插管:然后剥离另一侧颈动脉,插入与测压计相连的动脉插管,在插管与测压计通路中充满含适量肝素钠的氯化钠注射液。

(4) 记绿压:全部手术完毕后,将测压计的读数调节到与动物血压相当的高度,开启动脉夹,记录血压 K。

(5) 缓慢注入适宜的交感神经阻断药(如甲磺酸酚妥拉明),按大鼠每 100 g 体重注入 0.1 mg,隔 5~10 分钟用相同剂量再注射一次,待血压稳定后即可进行药液注射。各次注射速度应基本相同,并于注射后立即注入氯化钠注射液 0.5 mL,相邻两次注射的间隔时间应基本相同(一 般为 5~10 分钟),每次注射应在前一次反应恢复稳定以后进行。

(6) 选定高、低两剂量的垂体后叶标准品稀释液(mL), 高低剂量之比约为 1:0.6,低剂量应能使大鼠血压升高 1.33~3.33 kPa,将高低剂量轮流重复注入 2~3 次。

注意事项

A. 若高剂量所致反应的平均值大于低剂量所致反应的平均值,可认为该动物的灵敏度符合规定。

B. 在上述高低剂量范围内选定标准品稀释液的剂量 (ds) ,供试品溶液按品种项下规定的剂量 (d<[T] >),参照下列次序注射一组 4 个剂量:ds、d< [T] >、d< [T] >、ds,然后以第一与第三、第二与第四剂量所致的反应分别比较;如 d< [T] > 所致的反应值均不大于 ds 所致反应值的一半,即认为供试品的升压物质检查符合规定。

C. 按上述次序继续注射一组 4 个剂量,并按相同方法分别此较两组内各对 ds、d< [T] > 所致的反应值;若 d< [T] > 所致的反应值均不大于 ds 所致的反应值,则认为供试品的升压物质检查符合规定,若 d< [T] > 所致的反应值均大于 ds 所致的反应值,则认为供试品的升压物质检查不符合规定;否则应另取动物复试。如复试的结果仍有 d< [T] > 所致的反应值大于 ds 所致的反应值,即认为供试品的升压物质检查不符合规定。

来源:丁香实验

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