LLC-PK1(猪的近端肾小管细胞系)消化和传代

我和师兄是从04年初就开始用LLC-PK1细胞系筛选多种类型的、数量极多的各种可能有用的新药，摸索发现消化液的配方为0.25％的胰酶+0.02%EDTA 就行了，要配在PBS中，如果能加Hepes那就更保险了（有一次实验室Hepes用光了，配液时没加Hepes，照样没问题）

消化步骤：吸走培液后最好用PBS过一遍－>50ML培养瓶加2ML在37ºC预热消化液－>37ºC温箱放置1Min－>显微镜下观察，细胞松散开，但尚未脱落时，及时吸走消化液－>必要时可在吸走消化液的情况下，继续放置一会儿，待到细胞完全松散开，加培养基，吹打。这时候应该就是单细胞悬液了。

如果不是单细胞悬液，怎么办？

实验常需要我们的细胞是单细胞悬液的，要不然组间差异太大，无法说明问题。我们当时刚接手种子库的时候，复苏出来的多管LLC-PK1细胞成团特别严重！怎么吹打都无法得到单细胞悬液！（回想起来，可能是当初实验室的前几辈师兄师姐消化的时候没有搞好，或者没有吹打并且冻存了不合格的细胞所致）。后来我们到科室拿了几只5ML注射器，装上针头，来回吹打了5－6次，得到单细胞悬液了！细胞损伤小，下游的实验进展很顺。而且经过我们俩在这之后的正规操作，两个星期之后，再也不用针管抽吸，细胞消化下来就已经是单细胞了！