聚乙二醇沉淀法检测循环免疫复合物
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实验原理
一定浓度的MW6 000～8 000的聚乙二醇(PEG)，能沉淀免疫复合物，但不能沉淀正常球蛋白，沉淀的免疫复合物可用放射免疫法或用分光光度计测定其含量。
实验试剂
1. 0.1mol/L硼酸盐缓冲液称取硼砂0.64g，硼酸0.51g溶解于100ml蒸馏水中，pH值8.4。
2. 6%PEG取6gPEG(MW6 000)，溶于100ml硼酸盐缓冲液中。
3. 氯化铯溶液称取CsCl 1g，溶解于14ml蒸馏水中。
4. 热凝聚IgG、试验血清、毛细沉淀管(3×60mm)等。
实验步骤
1. 取被检血清作1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32稀释，同时稀释热凝聚IgG，并设缓冲液对照。
3. 取细沉淀管，各管加氯化铯溶液约10μl，上层加各种稀释血清，3000r/min离心10min
4. 取出，对着黑色背景观察，在两液交界，如出现白色沉淀环即为免疫复合物阳性。热凝聚IgG对照也应出现不同程度的沉淀环，缓冲液对照不出现环状沉淀。
全部免疫复合物检测阳性对照，均可用热凝聚IgG,其制备方法如下。
1. 取Cohn’sFⅡ球蛋白(或纯化IgG)1g，溶解于100ml 0.15mol/L生理盐水中，放室温2～3h。
3. 分次(每次1g)缓慢加入67gNa2 SO4 ，放4℃ 1h。
5. 将沉淀物溶解在适当的缓冲液中(如CFD缓冲液，C1q缓冲液等)，并用相同的缓冲液透析一昼夜。最后稀释至含蛋白量约为12～15mg/ml，保存于-20℃备用，用时将蛋白含量稀释至1mg/ml。
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