检测猪流行性腹泻病毒抗体
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实验试剂
2. 包被液(pH9.6)：NaHCO3 29.3g、Na2 CO3 19.5g，蒸馏水加至1000ml，置4℃保存。
4. 保温液：牛血清白蛋白(BSA) 0.1g、0.05% PBSTween20 100ml，4℃保存。
磷酸盐柠檬酸缓冲液(pH5.0)：0.2mol/L Na2 HPO4 (28.4g/L)25.7ml、0.1mol/L柠檬酸(19.2g/L)24.3ml、蒸馏水50ml。
底物溶液：磷酸盐柠檬酸缓冲液100ml、邻苯二胺(OPD)40mg、30%H2 O2 0.15ml，现配现用。
6. 终止液(2mol/L H2 SO4 )：浓硫酸22.2ml、蒸馏水177.8ml。
8. 酶标兔抗猪抗体结合物：酶结合物效价为1∶10 000。
9. 被检猪血清：采自疫区猪和病猪。PEDV免疫猪血清及健猪血清分别用于阳性、阴性对照。
实验设备
实验步骤
1. 抗原包被：用包被液将PEDV抗原作1∶5稀释包被反应板，每孔100μl，同时设阴性细胞培养物对照孔，置4℃过夜。
3. 加入被检血清：用保温液将被检血清作1∶100稀释，加入反应板相邻的两个孔中，每孔100μl。同时作阴、阳性标准血清对照，置37℃孵育1h。
5. 加入酶结合物：用保温液将酶结合物作1∶4 000稀释，加入反应孔中，每孔100μl，置37℃孵育1h。
7. 加入底物：每孔100μl，置室温暗盒内显色20min。
9. 测定OD值：用检测仪，于492nm波长，按仪器使用及制定标准要求调节仪器，测定各反应孔的OD值，记录结果。
结果判定凡检测血清P/N值超过14的，均判为阳性。肉眼观察，凡反应孔的颜色比正常细胞对照孔、正常血清对照孔颜色深者为阳性。
注意事项
2. 为了增加聚苯乙烯板对某些抗原或抗体的吸附作用，可试用鞣酸处理，牛血清白蛋白处理，改变载体的表面电荷，引入化学基团等方法处理反应板。
1) 封闭：可选用4%～10%牛血清白蛋白、10%小牛血清、10%马血清、01%～25%明胶等。
2) 去污剂：可阻止非特异吸附，而不影响特异性抗原抗体反应。常用的有005%～05%吐温20、吐温80、01%NP40等。
3) 高盐浓度缓冲液：如含05mol/L NaCl及0.05%吐温的磷酸盐缓冲液(pH8)。
4) 缩短孵育时间：保温液中加入终浓度4%的聚乙二醇(PEG，MW6 000)
![[JL17806] 猪流行性腹泻病毒抗体(PEDV)ELISA试剂盒](https://img1.dxycdn.com/2018/0109/785/3254426312274143674-14.jpg!wh200)
