猪体内胚胎的获取

猪体内胚胎的获取需要先超排处理母猪后收集胚胎。目前国际通用胚胎一般分为A，B，C.D四个等级：

A级：胚胎发育阶段与胚龄一致，胚胎形态完整，轮廓清晰，呈球形，分裂球大小均匀，结构紧凑，色调和透明度适中，无游离的细胞或很少，变性细胞比例＜10％。

B级：胚胎发育阶段与胚龄基本一致，轮廓清晰，分裂球大小基本一致，色调和透明度良好，可见到一些游离的细胞和液泡，变性细胞占10％～30％。

C级：胚胎发育阶段与胚龄不太一致，轮廓不清晰，色调变暗，结构较松散，游离的细胞和液泡较多，变性细胞占30％-50％。

器材：

⑥显微镜、微分干涉差（DLC）倒置显微镜

试剂：

猪体内胚胎获取的基本过程可分为如下几步：

一、超排处理

2.另一种超排方法采用PMSG 1000U，发情配种后半小时内肌注hCG 500U。首次卵裂发生在受精后36～48小时（即妊娠36～48小时；首次受精定为第0天），妊娠第3天，胚胎发育到4～6细胞阶段，到达输卵管，子宫角。

在6～7天到达孵化囊胚阶段。为了避免收集到孵化囊胚，以采集妊娠5～6天猪胚胎为宜，在此阶段通常能收集到桑椹胚和囊胚。

二、胚胎的采集

2.将母猪仰卧保定于手术架上，在其腹部倒数第2对乳头处沿腹中线用手术刀切开一个8～10 cm的创口，将子宫角、卵巢、输卵管从切口处拉出体外，观察记录每侧卵巢上排卵点数。

从子宫角距尖端1／2～2／3部位朝子宫角方向插入牛用冲卵管或胚胎回收针（自制）并固定。

3.用注射器吸取60 ml冲卵液（添加2％ 新生牛血清的杜氏磷酸盐缓冲液），从宫管结合部子宫角尖进针，缓缓注入冲卵液及少许空气，将含胚冲卵液收集于50 ml带盖离心管内，

4.以相同方法冲洗另一侧子宫角。在冲卵操作时用37 ℃的DPBS＋0.3％ BSA的冲卵溶液进行冲卵。

5.冲出的胚胎放入37 ℃的DPBS＋10％ FCS的溶液中对胚胎进行质量的鉴定和分类。

6.选择不同发育阶段的胚胎分别进行冷冻保存。

三、胚胎的鉴定