反相高效液相色谱法测定开郁舒肝丸中大黄素的含量

【摘要】  目的：建立高效液相色谱法测定开郁舒肝丸中大黄素含量的方法。方法：采用C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），以甲醇-0.1%磷酸（85:15）为流动相，流速为1.0ml・min－1，检测波长为254nm。结果：大黄素进样量在0.105～1.375μg线性范围内呈良好的线性关系，相关系数为0.9999，回收率为99.01%，RSD为1.1%。结论：本方法是可靠、简便的开郁舒肝丸中大黄素含量测定新方法。

【关键词】  高效液相色谱法 开郁舒肝丸 大黄素 含量测定

    HPLC Determination of Cinnamaldehyde in kaiyu shugan pill

      【Abstract】  Objective:To establish an HPLC method for determination of Cinnamaldehyde in kaiyu shugan pill .Method:The chroma tographic column of Shimadu VP-ODS was used .The mobile phase consisted of methanol-0.1% phosphoric acid（85：15）and the flow rate was 1.0ml・min-1.The detertion wavelength was 254nm .Results：The linear of scutellarin was 0.105～1.375μg（r=0.9999）.The average recovery of assay was 99.01% with RSD 1.1% .Conclsion：The HPLC method is simple and reliable for the Cinnamaldehyde in anti- tonsillitis matches .

      【Key words】HPLC；kaiyu shugan pill；Cinnamaldehyde；determination

      开郁舒肝丸为临床常用的中成药，由当归、蒲黄、五灵脂（醋炒）、赤芍、小茴香、川芎、肉桂、大黄等十七味中药组成，具温经活血、散寒止痛功效。现执行标准《中国药典2005年版一部》，此标准只有赤芍的薄层鉴别项目，无含量测定项目。笔者经多次试验，研究建立了高效液相色谱法测定开郁舒肝丸中大黄素的含量，以作为开郁舒肝丸的质量控制方法之一。结果表明，此法能使被测组分很好地分离，且在测定范围内线性关系良好，能迅速、准确地指导生产和监控开郁舒肝丸质量。

    1  仪器与试药

      日本岛津LC-10ATVP高效液相色谱仪，SPD-10AVP紫外检测器，浙江大学N2000双通道色谱工作站。

      开郁舒肝丸（吉林市双士药业有限公司生产，批号：070801，070802，070803），大黄素对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110710-200212）。甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试药均为分析纯。

    2  方法与结果

    2.1  色谱条件与系统适用性  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。色谱柱：VP-ODS 250×4.6，柱号4042784；甲醇-0.1%磷酸（85:15）为流动相；检测波长为254nm。流速：1.0ml・min－1。柱温：室温（25℃）。理论板数按大黄素峰计算应不低于3000。

    2.2  对照品溶液的制备  精密称取大黄素对照品10mg，置100ml量瓶中，用50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取大黄素溶液5ml，置100ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，即得。（大黄素每1ml中含5μl）。

    2.3  供试品溶液的制备  取本品6g，精密称定，研细，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，称重，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25ml，浓缩至干，加30%乙醇-盐酸（10:1）35ml，沸水浴回流水解1小时，放冷至室温，转移至分液漏斗中，用氯仿提取5次，每次20ml，合并氯仿层，水洗两次，每次30ml，弃去水层，氯仿层低温蒸干，残渣加甲醇溶解，定量转移至10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

    2.4  阴性对照品溶液的制备及测定  为进一步考察实验设计及含量测定方法的可行性和专属性，取不含大黄的处方，按制备工艺制成缺大黄的阴性对照品，再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。精密吸取10μl注入液相色谱仪，按上述方法测定，结果表明大黄阴性对照品的色谱图在大黄素相应的保留时间附近无干扰峰，溶剂峰亦无干扰，证明本法具有良好的专属性。

    2.5  稳定性考察  精度吸取大黄素对照品溶液10μl，在上述色谱条件下，于0、2、4、8、24hr分别进样，结果大黄素峰面积的相对偏差（RSD）为0.45%（n=5），表明大黄素对照品溶液在24hr内稳定。

    2.6  线性关系考察  精密吸取大黄素对照品溶液，分别进样5、10、15、20、25、30μl测定，以进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，得线性回归方程为：y=4475603.341584x－9060.425（r=0.99996）。线性范围0.105～1.375μg。

    2.7  精密度考察  精密吸取供试液，连续进样5次，进样量20μl，以峰面积积分值计算，RSD为0.12%。结果表明，本方法操作精密度良好。

    2.8  重复性考察  取开郁舒肝丸（批号：070801）独立进行五次试验，依法测定，结果大黄素的平均含量为4.6mg・丸－1，RSD为0.10%。

    2.9  回收率考察  精密量取已知含量的开郁舒肝丸（批号070802）5份，每份20ml精密量取，精密加入一定量大黄素，按2.2项下测定法测得回收率为99.01%，RSD为1.1%（n=5）。

    2.10 样品测定  依上述方法测定3批样品，以外标法计算样品中大黄素含量，高效液相色谱图如下。

    3  结论

      根据《中国药典2005年版一部》标准，开郁舒肝丸具温经活血，散寒止痛功效。用于寒凝血瘀所致的月经后期、痛经、产后腹痛，症见行经后错、行经小腹冷痛、经血紫暗、有血块、产后小腹疼痛喜热、拒按。为临床广泛应用的妇科用药。本文建立的高效液相色谱法测定开郁舒肝丸中大黄素含量，样品处理简便、可靠，与其他成分分离良好，为提高药品质量标准提供有效依据。

【参考文献】
[1] 国家药典委员会．中华人民共和国药典[S]．2005年版一部．北京：化学工业出版社，2005，1．

[2] 王宝琴．中成药质量标准与标准物质研究[J]．北京：中国医药科技出版社，1994，3．