反相高效液相色谱法测定非洛地平缓释片的含量

【摘要】  目的：建立反相高效液相色谱法测定非洛地平缓释片含量的方法。方法：采用sinochrom-ODS-BP色谱柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)，以甲醇∶水(70∶30)为流动相，紫外检测波长240 nm，流速为1.2 mL/min，柱温为30 ℃。结果：本法在非洛地平浓度为5 μg/mL～50 μg/mL范围内线性关系良好,相关系数γ=0.9996，，日内精密度RSD≤1.7%。方法平均回收率为99.5%。结论：本法处理简便快速，测定准确、重现性好，适合于非洛地平缓释片质控中的含量测定。

【关键词】  非洛地平；反相高效液相色谱法；含量测定

    Abstract  Objective：A reversed phase HPLC method was developed to determine the contents of felodipine in felodipine sustained-release tablets．Methods：sinochrom ODS-BP column(200 mm×4.6 mm，5 μm)was used，and the mobile phase was composed of methanol-water(70∶30)．The detection wavelength was at 240 nm with the flow rate at 1.2 mL/min，column temperature was controlled about 30 ℃．Results：The linear range was 5 μg/mL～50 μg/mL for felodipine（γ=0.9996），The average recoveries of felodipine were 99.5% ( RSD≤1.7%)．Conclusion：This method appeared to be rapid，simple and accurate．

    Key words  Felodipine；RP-HPLC；Content Determination

    非洛地平是一种新型的二氢吡啶类钙离子通道阻断剂，主要用于治疗各种原发性高血压。其缓释片剂型具有长效、不良反应少等优点，临床应用广泛［1］。非洛地平的含量测定方法有氧化还原法、紫外分光光度法［２］等，但这些方法的专属性差，影响测定的准确性。亦有学者采用高效液相色谱法对非洛地平片及其复方制剂进行了含量测定［３，４］，本文建立了非洛地平缓释片的高效液相色谱法含量测定方法，具有操作简便，测定准确、精密度好等优点。

    1  仪器与试剂

    日本岛津高效液相色谱仪（Shimadzu，LC-10ATVP），岛津SPD-6AV紫外检器，非洛地平对照品(中国生物制品检定所），甲醇为色谱纯，水为二次重蒸水；非洛地平缓释片(阿斯特拉（无锡）制药有限公司，5 mg/片，批号0708002、0708015、0708024)。

    2  方法与结果

    2.1  色谱条件

    色谱柱：sinochrom ODS-BP 色谱柱（5 μm，200 mm×4.6 mm，大连依力特分析仪器有限公司），检测波长240 nm，进样量20 μL；流动相∶甲醇：水（70∶30），用0.45 μm微孔滤膜过滤；流速：1.2 mL/min，柱温30 ℃。以峰面积按外标法定量。

    2.2  储备液的配制

    精密称取非洛地平对照品10 mg,置100 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

    2.3  标准曲线的制备

    分别精密吸取非洛地平储备液，用甲醇配制成含非洛地平5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、30 μg/mL、50 μg/mL的标准溶液，进样20 μL测定。以非洛地平峰面积对非洛地平浓度回归，得回归方程：Y=0.004+0.035X，相关系数γ=0.9996，说明非洛地平浓度在5 μg/mL～50 μg/mL范围内线性关系良好。

2.4  加样回收试验

    取非洛地平缓释片10片，研细，精密称取相当于1.0 mg非洛地平粉末数份，置100 mL棕色容量瓶中，再精密加入浓度为0.1 mg/mL的非洛地平对照品溶液5 mL、10 mL、25 mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀。制成不同浓度的非洛地平供试品溶液。用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液进样20 μL，按峰面积代入回归方程，计算含量。计算结果见图1、表1。

    表1  非洛地平加样回收试验结果  （n=3）

    编号加入量(mg)测得量(mg)回收率RSD(%) 10.50.51100.21.5   21.00.9999.21.1   32.52.4899.10.9

    2.5  精密度试验

    配制浓度为5 μg/mL、20 μg/mL、50 μg/mL的标准品溶液各三份，在日内重复进样5次其RSD≤1.7%。

    2.6  样品测定

    取非洛地平缓释片10片，研细，精密称取相当于2.5 mg非洛地平粉末置100 mL棕色容量瓶中，加70 mL甲醇，超声10 min后,加甲醇稀释并定容至刻度，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液进样20 μL，按峰面积代入回归方程，计算含量。结果见表2。表2  非洛地平缓释片含量测定结果

    3  讨论

    3.1  对非洛地平的含量测定有多种方法：氧化还原法和紫外分光光度法分别用于非洛地平原料和非洛地平片的含量测定，虽操作简便但专属性欠佳。在本文所采用的高效液相色谱法的条件下，非洛地平的保留时间适中（约为7.85 min），与相邻杂质峰的分离度都大于1.5，可以与共存的有关杂质分离，从而消除它们的干扰，与其它测定方法相比，具有测定准确、精密度好等优点。

    3.2  本试验建立的方法同文献［３］所报道的采用正相色谱柱，以正己烷：氯仿(25∶75)为流动相的方法相比，具有流动相配制简单的特点，同时避免了使用氯仿、正己烷等有毒溶剂。也避免了文献［４］方法在流动相中添加十二烷基硫酸钠作为离子对试剂，简化了试验的操作，避免了费时的色谱柱平衡过程以及试验完毕后的色谱柱冲洗过程，具有操作简便的特点，在实际的工作中，更易于推广使用。

    3.3  溶液稳定性：非洛地平对光敏感，遇光不稳定，易产生副产物，而使非洛地平主成分含量降低，因此在试验过程中，所有操作均需在避光条件下进行，否则会使结果重现性降低，影响结果的准确性。

【参考文献】
  ［１］ 沈以凤，常立刚.非洛地平的药理作用及临床应用.中国药学杂志,1998，33（3）：181～182．

［２］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)［Ｍ］.北京：化学工业出版社，2005：330．

［３］ 谭 玲，张 兵．高效液相色谱法测定非洛地平片剂含量.中国医院药学杂志，2000，20（6）：331～332．

［４］ 李振强，吴 锋.复方非洛地平缓释片含量测定方法的研究.中国药学杂志，2004，39（9）：693～694．