高效液相色谱法测定布美他尼片的含量

[摘要] 目的：建立测定布美他尼片含量的方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为Agilent(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为0.05 mol/L磷酸二氢钾（用磷酸调节pH至3.0±0.5）-乙腈（50∶50），检测波长为267 nm。结果：精密度及稳定性均良好；在20～60 μg/ml浓度范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，相关系数为0.999 4，平均回收率为99.75%，RSD为0.87%。布美他尼与其他杂质峰的分离度均符合要求。结论：该方法简便，重现性好，可用于测定布美他尼片的含量。

[关键词] 布美他尼片；高效液相色谱法
　　
　　[Abstract] Objective:To develop a method for the determination of Bumetanide in Bumetanide Tablets. Methods:An HPLC method was used with column Agilent (4.6 mm×150 mm,5 μm)；The mobile phase was a mixture of 0.05 mol/L Potassium dihydrogen phosphate（pH to 3.0±0.5 by Phosphoric acid）-acetonitrile (50∶50)with the detection wavelength at 267 nm. Results:The precision and stability were fine.The linear correlations of Bumetanide were observed over the concetrations 20～60 μg/ml(r=0.999 4)respectively.The average recoveries of Bumetanide were 99.75% respectively.RSD were 0.87%.The resolution between the respective peaks of Bumetanide and the other peaks conformed to the requirements. Conclusion:The method was convenient and reproducible for the assay of Bumetanide in Bumetanide Tablets.

　　[Key words] Bumetanide tablets;HPLC
　　
　　布美他尼片是一种强效利尿剂，用于治疗水肿性疾病、高血压及高血钙症和高血钾症。对水和电解质排泄作用基本同呋噻米，其利尿作用为呋噻米20～60倍。主要抑制肾小管髓襻升支厚壁段对NaCl的主动吸收，对近端小管重吸收Na＋也有抑制作用。中国药典2005年版测定布美他尼片含量的方法为紫外分光光度法[1]。本文采用HPLC法测定布美他尼片的含量，方法专属性强、灵敏度高、操作简便、结果准确[2]，现报道如下：
　　1仪器与试剂
　　岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪，SPD-10A紫外检测器，AS230自动进样器，AT-330柱温箱，HW2000色谱工作站，BP211D电子天平；乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯；水为超纯水；布美他尼对照品(中国药品生物制品检定所，批号100174～200402，99.5%)；布美他尼片（湖南紫光古汉南岳制药有限公司070108，070315，070402）。
　　2方法与结果
　　2.1色谱条件
　　色谱柱Agilent(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为0.05 mol/L磷酸二氢钾（用磷酸调节pH至3.0±0.5）-乙腈（50∶50）；检测波长267 nm；流速1.0 ml/min；进样量2０ μl；柱温:25℃。理论塔板数按布美他尼峰计算不低于3 000。
　　2.2供试品溶液与对照品溶液的制备
　　2.2.1对照品溶液取布美他尼对照品适量，精密称定，置250 ml量瓶中，加甲醇制成1 ml含40 μg的溶液，作为对照品溶液。
　　2．2．2供试品溶液取本品20片，精密称定，研细，精密称取粉末适量（约相当于布美他尼2 mg），置50 ml量瓶中，加流动相适量，振摇溶解20 min,加流动相稀释至刻度，摇匀滤过，取续滤液作为供试品溶液。
　　2．2．3空白对照溶液以相同的处方比例，制得不含布美他尼的空白样品。按“2.2.2”项下方法制成空白对照溶液。
　　2.2.4测定方法吸取对照品溶液和供试品溶液20 μl按“2.1”色谱条件进行分析，根据色谱峰面积，以外标法计算样品含量。结果表明供试品色谱图中呈现与布美他尼对照品保留时间相应的色谱峰，而空白对照无干扰。见图1。（略）　　
　　2.3线性关系考察
　　精密称取在60℃减压干燥4 h的布美他尼对照品25 mg，置100 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液；精密吸取对照品贮备液2，3，4，5，6 ml分别置25 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，进样，记录峰面积。以浓度(C)对峰面积(A)进行线性回归，得回归方程为C=14.39×10-4A+0.000 31，r=0.999 4。结果表明布美他尼在20～60 μg/ml范围内线性关系良好。
2.4回收率实验
　　精密称取同一己知含量样品(批号:070108)适量加流动相制成每毫升含0.5 mg的溶液，精密量取2 ml共5份分别加入50 ml的量瓶中，再分别精密加入上述对照品贮备液(250 μg/ml)2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 ml，照“2.2.2”项下操作，并按“2.1”色谱条件测定。结果见表1（略），平均回收率为99.42，RSD为1.71%。
　　2.5稳定性和精密度实验
　　取供试品溶液，分别在0，1，2，4，6，8 h进样20 μl，测定峰面积，RSD为0.92%，结果表明样品溶液在8 h内稳定。供试品连续进样5次，其标示百分含量的RSD为0.68%，结果表明进样精密度好。
　　2.6重复性实验
　　取同批号样品6份，照“2.2.2”项下方法操作，即得6份同一样品的供试品溶液，各吸取20 μl进样，计算含量，RSD为0.83%，结果表明重现性较好。
　　2.7含量测定
　　按上述测定方法测定布美他尼片(批号为070108，070315，
　　070402)中布美他尼的含量，并与UV法测定的结果相比较。结果见表2。
　　3讨论
　　取布美他尼对照品溶液在200～400 nm波长范围内进行紫外扫描，在228,267,344 nm波长处有最大吸收，经比较选择267 nm作为测定波长，在该波长处检测灵敏度高（检出限量为0.05 μg），且不受辅料及其他成分干扰，重现性好。
　　中国药典2005年版测定布美他尼片含量的方法为紫外分光光度法（检测波长为328 nm）[1]。含量均匀度制成相同的溶液亦可用此法测定。
　　[参考文献]
　　[1]国家药典委员会.中国药典[S].二部.北京：化学工业出版社，2005.94.
　　[2]彭东明,黄可龙.高效液相色谱法测定注射用布美他尼含量[J].中国现代应用药学,2006,23(5):405-406.