高效液相色谱法（动物源食品中四环素类兽药多残留测定实验）

动物肝脏 肾脏 肌肉组织 水产品 牛奶
聚丙烯 乙二胺四乙酸二钠 甲醇-水 甲醇-乙酸乙酯 乙腈 三氟乙酸
聚丙烯离心管 固相萃取柱 高效液相色谱 串联质谱仪

1. 提取

动物肝脏、肾脏、肌肉组织、水产品：称取均质试样5 g（精确到0.01 g），置于50 mL聚丙烯离心管中，分别用约20 mL、20 mL、1O mL、0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine缓冲溶液（0.1 mol/L。称取60.5 g乙二胺四乙酸二钠放入1625mL Mcllvaine缓冲溶液中，使其溶解，摇匀）低温超声提取三次，3000 r/min，5 min离心（温度低于15 ℃），合并上清液（注意控制总提取液的体积不超过50 mL），并定容至50 mL，混合，5000 r/min，离心10 min（温度低于15 ℃），过滤，待净化。

牛奶：称取混匀试样5 g（精确到0.01 g），置于50 mL聚丙烯离心管中，用 0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine缓冲溶液溶解并定容至50 mL，旋涡混合1 min，低温超声10 min，冷却至4 ℃， 5000 r/min，离心10 min （温度低于15 ℃），过滤，待 净化。

2. 净化

准确吸取10 mL提取液以1 滴/s的速度过Waters Oasis HLB （60 mg，3 mL）固相萃取柱，待上清液完全流出后，依次用5 mL水和5 mL甲醇-水（5 + 95）淋洗，弃去全部流出液。减压抽干5 min，最后用10 mL甲醇-乙酸乙酯（10 + 90）洗脱。将洗脱液吹氮浓缩至干（温度小于30 ℃），用1.0 mL标准稀释液溶解残渣，低温超声5 min，过0.45 um滤膜，供高效液相色谱/串联质谱仪测定。

3. 5HPLC 测定条件

色谱柱：Inertsi1 C8-3，5 um，150 mm×2.1 mm；

流动相：甲醇，乙腈，0.01 mol/L三氟乙酸，洗脱梯度见表3-11（柱平衡时间5 min）；



流速：1.5 mL/min；

柱温：30 ℃；

进样量：30 uL。

4. HPLC-MS/MS 测定条件

色谱柱：Inertsil C8-3，50 m，150 mm × 2.1 mm；

流速：0.3 mL/ min；

柱温：30 ℃；

进样量：300 L；

流动相：甲醇 + 0.01 mol/L三氟乙酸。

离子化模式：ESI+ ；

质谱分辨率：单位分辨率；

雾化气（NEB）：6.0 L/min；

气帘气（CUR）：10.0 L/min；

喷雾电压（IS）：4500 V；

去溶剂温度（TEM）：500 ℃；

去溶剂气流：700 L/min；

碰撞气（CAD）：6.0 L/min（氮气）。