高效液相色谱法测定激素的具体步骤是什么？

1.样品制备：将待测激素样品进行处理，如加标准品、调节pH值、蛋白质去除和提取等，使其达到HPLC测定的要求。

2.样品进样：将样品通过进样器注入HPLC系统中。

柱子选择：根据待测激素的特性，选择适合的色谱柱。

3.流动相制备：根据样品的特性，选择合适的流动相，如水、甲醇、醋酸等，并按照一定的比例混合。

4.色谱条件设置：根据样品性质、柱子类型和流动相，设置一定的流速、温度、波长等参数以保证良好的分离效果。

5.HPLC分离：样品进入色谱柱后，根据分子在柱中的亲和性差异，经过分离和纯化。

6.检测：通过检测器检测样品的吸收峰和荧光峰等，以便于定量和鉴定激素。

7.数据处理：根据检测出的峰面积或峰高等信息，利用内标法或外标法计算出激素的浓度。

基本步骤如下：

样品制备：将生物样品（例如血清、尿液、组织）离心去除悬浮物，取上清液进行处理。处理方式包括加入提取剂提取、加入有机溶剂沉淀蛋白等。

衍生化反应：对一些不具有天然荧光或吸收的激素，需要进行衍生化反应，以便在色谱中检测到。衍生化反应方式包括加入荧光素衍生化剂、取代基衍生化剂等。

样品进样：将处理后的样品注入进样器中，通过自动进样阀进入HPLC色谱系统。

色谱分离：将样品在高压作用下通过高效液相色谱柱进行分离，柱子内填充不同材质的固定相，以分离激素。

检测：使用紫外检测器或荧光检测器检测分离后的化合物，得到吸收或荧光信号，再通过计算机或积分器将信号转化为峰面积或峰高。

数据处理：通过标准曲线或外标法等方法，将测得的峰面积或峰高值转换为激素的浓度。