气相色谱法测定头孢匹胺中的残留溶剂

【摘要】  目的 建立测定头孢匹胺中的残留溶剂含量的方法。方法 采用气相色谱法，用涂渍PEG�20M的填充柱,N2为载气，柱温100 ℃，以正丁醇为内标物，FID检测。结果 丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺分别在进样量0.500～2.000 μg、0.041～0.164 μg和0.088～0.352 μg范围内, 与相应溶剂峰/内标峰的面积比值线性关系良好(r分别为0.9997、0.9994和0.9999), 丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺的平均回收率分别为101.0%、97.7%和100.4%，重复进样峰面积RSD分别为0.31%、1.28%和0.73%（n=5）。结论 所建立的方法专属性好，简便准确，可用于检测头孢匹胺中的残留溶剂。

【关键词】  气相色谱法 头孢匹胺 残留溶剂 丙酮 乙腈 二甲基甲酰胺

　　Abstract:Objective To establish a method for content determination of the residual solvents in cefpiramide. Methods The analysis was performed on a column coated by PEG�20M under the column temperature of 100 ℃, with N2 as carrier gas. Results The standard curves of acetone, acetonitrile and N,N�dimethylformamide were linear within the ranges of 0.500～2.000  μg, 0.041～0.164  μg and 0.088～0.352 μg(r=0.9997, 0.9994 and 0.9999), respectively. The average recoveries of acetone, acetonitrile and N,N�dimethylformamide were 101.1%, 97.7% and 100.4%, while the RSD for replications were 0.31%,1.28% and 0.73%（n=5）,respectively.  Conclusion The method is specific, simple and accurate for the quality control cefpiramide raw materials.

　　Key words: GC; cefpiramide; residual solvent; acetone; acetonitril; N,N�dimethylformamide

　　头孢匹胺（cefpiramide）是第三代头孢菌素类广谱抗生素，可进一步加工成钠盐或直接用于临床,对革兰氏阳性菌、阴性菌及厌氧菌均有强大的抗菌活力，对β�内酰胺酶稳定性好，有良好的临床价值［1］。由于各厂生产的头孢匹胺采用工艺和使用的溶剂不同，因而残留溶剂的种类也有所不同，需分别研究出适合的方法进行准确测定。本研究基于广州白云山化学制药厂生产的头孢匹胺产品，其生产过程中使用到国际协调组织（ICH）规定的二类溶剂乙腈和二甲基甲酰胺，以及三类溶剂丙酮,应在质量标准中加以监控。已有文献［2-3］报道类似品种头孢匹胺钠中残留溶剂的测定方法，但由于被测残留溶剂种类不同而不可直接引用。本文报道的气相色谱法，专属性强，能在同一次试验中同时测定3种溶剂的含量，无需程序升温，方法简便准确。

　　1  仪器与试药
   
　　岛津GC�14A气相色谱仪；大连依利特公司产的涂渍PEG�20M的填充玻璃柱（3.2 mm×2 m）。丙酮和二甲基甲酰胺对照品（均为分析纯试剂，含量100.0%），乙腈对照品（为色谱纯试剂，含量100.0%），头孢匹胺原料由广州白云山化学制药厂提供，高纯度氮气由广州气体厂生产。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件与测定法
      
　　用涂渍PEG�20M的填充玻璃柱，以氮气为载气，流量10 mL/min,进样口温度210 ℃，柱温100 ℃，氢火焰离子化检测器温度250 ℃。
   
　　称取正丁醇适量，加水制成50 μg/mL的溶液，作为内标液。精密称取丙酮对照品约100 mg、乙腈对照品约8 mg和二甲基甲酰胺对照品约18 mg置100 mL量瓶中，加内标液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称取头孢匹胺供试品约1 g，置具塞试管中，准确加入内标液5 mL，强力振摇5 min，过滤，取续滤液作为供试品溶液。分别精密量取对照品溶液和供试品溶液1 μL，注入气相色谱仪，记录色谱图，用内标法以峰面积计算。

　　2.2  色谱参数、检测限和定量限
      
　　头孢匹胺供试品溶液的色谱图见图1，丙酮、乙腈、正丁醇（内标）和二甲基甲酰胺峰柱效分别为850、800、600和1 000，拖尾系数分别为1.4、1.2、1.3和1.3, 丙酮与乙腈、乙腈与正丁醇及正丁醇与二甲基甲酰胺峰之间分离度分别为3.9、2.8和7.7。丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺的检测限（信噪比3∶1）分别为1 ng、0.5 ng和0.5 ng,定量限（信噪比10∶1）分别为2 ng、1 ng和2 ng。

　　a.丙酮;b.乙腈;c.正丁醇;d.二甲基甲酰胺

　　图1  头孢匹胺中的残留溶剂气相色谱图（略）

　　Fig.1  GC Chromatograms of the residual solvents in the　raw materials

　　2.3  精密度试验
      
　　取对照品溶液重复进样5次，测得丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺峰面积与内标峰面积比的RSD分别为0.31%、1.28%和0.73%。同一份均匀样品，在不同仪器、不同操作者条件下测得3份结果，算出丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺含量结果重现性分别为1.5%、1.9%和1.7%。

2.4  线性关系与范围
      
　　分别精密称取丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺对照品, 按“2.1”项方法分别用内标溶液定量配制并稀释成质量浓度分别为丙酮500、750、1 000、1 500 μg/mL，乙腈41、61.5、82、123、164 μg/mL和二甲基甲酰胺88、132、176、264、352 μg/mL的溶液，各准确进样1 μL测定，结果进样量（m)与待测溶剂峰面积/内标峰面积比值（A）的线性回归方程分别为：丙酮 A1=9.4826m1-0.2456（r=0.9997）,乙腈 A2=13.4495m2+0.03646（r=0.9994）,二甲基甲酰胺 A3=4.3421m3+0.0094（r=0.9999）；丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺的进样量测定范围分别为0.500～2.000 μg、0.041～0.164 μg和0.088～0.352 μg。

　　2.5  回收率试验
   
　　按“2.1”项方法, 分别用内标液配制对照品溶液,供试品溶液，以及丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺的浓度均相当于对照品溶液的80%、100%和120%的供试品加对照品溶液各3份, 依法进样测定, 算出丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺的加样回收结果如下：
      
　　丙酮：100.1%、104.6%、100.5%、101.4%、102.9%、99.3%、100.0%、99.3%和100.8%，平均101.0%（RSD 1.75%）。
      
　　乙腈：97.1%、97.5%、96.1%、99.8%、96.6%、96.3%、99.0%、99.2%和97.9%，平均97.7%（RSD 1.40%）。
      
　　二甲基甲酰胺:101.2%、99.3%、100.8%、102.8%、101.4%、99.6%、99.3%、98.6%和101.0%，平均100.4%（RSD 1.32%）。

　　2.6  样品测定
      
　　按“2.1”项方法分别测定头孢匹胺样品3批，测得其丙酮含量分别为：0.015%、0.013%和0.011%；乙腈含量分别为0.013%、0.011%和0.010%；二甲基甲酰胺含量分别为0.005%、0.002%、0.001%,均符合ICH建议的限度（0.5%、0.041%和0.088%）。

　　3  讨论

　　3.1  3种溶剂均有很好的水溶性，头孢匹胺样品加水强力振摇后形成极细微颗粒的混悬液，能保证残留溶剂的溶出。

　　3.2  二甲基甲酰胺为较高沸点的溶剂，其水溶液难以采用顶空进样法测定，且二甲基甲酰胺直接进样对毛细管柱伤害较大，因而选用填充柱直接进样法。

　　3.3  本试验采用恒定柱温条件下测定有利于测定稳定性，采用内标法有利于减少进样操作的误差。

　　3.4  以上试验表明，本气相色谱法专属性强，能在恒定柱温条件下同时测定3种残留溶剂的含量，方法快捷准确，可用于头孢匹胺残留溶剂的监控。

【参考文献】
［1］ 周乐，王明贵.头孢匹胺的体外抗菌作用［J］.中国抗生素杂志，1997，22（4）：275-278.
［2］ 王喜梅，李晓燕，周海云，等.顶空法测定头孢匹胺钠中的溶剂残留［J］.中山大学学报：自然科学版，2004，43（4）：122-124.
［3］ 李弘韬，杨敏，万江陵，等.顶空固相微萃取-气相色谱法测定头孢匹胺钠中多种有机溶剂残留量［J］.药物分析杂志，2005,25（1）：37-39.
［4］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部［S］.北京：化学工业出版社，2005：附录V E和附录VIII P.