原理
苯酚在紫外区有两个吸收峰，在中性溶液中λmax 为 210nm 和 270nm，在碱性溶液中，由于形成酚盐，而使该吸收峰红移至 235nm 和 288nm。所谓差值光谱就是指这两种吸收光谱相减而得到的光谱曲线。实验中只要把苯酚的碱性溶液放在样品光路上，把中性溶液放在参比光路上，即可直接绘出差值光谱。
在苯酚的差值光谱图上，选择 288nm 为测定波长，在该波长下，溶液的吸光度随苯酚浓度的变化有良好的线性关系，遵循比耳定律，即ΔA=Δε?C?L，可用于苯酚的定量分析。差值光谱法用于定量分析，可消除试样中某些杂质的干扰，简化分析过程，实现废水中的微量酚的直接测定。
在苯酚的差值光谱图上，选择 288nm 为测定波长，在该波长下，溶液的吸光度随苯酚浓度的变化有良好的线性关系，遵循比耳定律，即ΔA=Δε?C?L，可用于苯酚的定量分析。差值光谱法用于定量分析，可消除试样中某些杂质的干扰，简化分析过程，实现废水中的微量酚的直接测定。
材料与仪器
KOH 溶液 苯酚标准溶液
WFZ-26A 紫外可见分光光度计 1cm 厚石英比色吸收池 25ml 容量瓶
WFZ-26A 紫外可见分光光度计 1cm 厚石英比色吸收池 25ml 容量瓶
步骤
1．确定测定波长：以蒸馏水作参比，分别绘制苯酚在中性和碱性溶液中的吸收曲线。然后，将苯酚的中性和碱性溶液分别放置在参比和样品光路中，绘制二者的差值光谱曲线，根据该差值光谱曲线，确定其测定波长。
2．绘制标准曲线：用移液管分别移取苯酚标准溶液 1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml于 5 个 25ml 的容量瓶中，另取同样体积苯酚标准溶液于另 5 个 25ml 容量瓶中，分别用水和 0.1M KOH 稀释至刻度（共需 10 个 25ml 容量瓶）。每对容量瓶所对应的溶液浓度分别是10mg/L、15mg/L、20mg/L、25mg/L、30mg/L。每一对苯酚标准溶液中的苯酚浓度相同，只是稀释溶剂不同。在测定波长下，把碱性溶液稀释的标准溶液放在样品光路上，把中性溶液稀释的标准溶液放在参比光路上，测定吸光度差值。
3．测量未知样品中苯酚含量：用移液管分别移取含酚水样 10ml 于 2 个 25ml 容量瓶中，分别用水和 0.1M KOH 稀释至刻度。在测定波长下，把碱性溶液稀释的待测试样放在样品光路上，把中性溶液稀释的待测试样放在参比光路上，测定吸光度差值。
2．绘制标准曲线：用移液管分别移取苯酚标准溶液 1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml于 5 个 25ml 的容量瓶中，另取同样体积苯酚标准溶液于另 5 个 25ml 容量瓶中，分别用水和 0.1M KOH 稀释至刻度（共需 10 个 25ml 容量瓶）。每对容量瓶所对应的溶液浓度分别是10mg/L、15mg/L、20mg/L、25mg/L、30mg/L。每一对苯酚标准溶液中的苯酚浓度相同，只是稀释溶剂不同。在测定波长下，把碱性溶液稀释的标准溶液放在样品光路上，把中性溶液稀释的标准溶液放在参比光路上，测定吸光度差值。
3．测量未知样品中苯酚含量：用移液管分别移取含酚水样 10ml 于 2 个 25ml 容量瓶中，分别用水和 0.1M KOH 稀释至刻度。在测定波长下，把碱性溶液稀释的待测试样放在样品光路上，把中性溶液稀释的待测试样放在参比光路上，测定吸光度差值。
注意事项
1．用实验步骤 2 中测得的吸光度差值，绘制吸光度—浓度曲线，计算回归方程。
2．用吸光度—浓度曲线或回归方程，计算水样中的苯酚含量（mg/L）。
2．用吸光度—浓度曲线或回归方程，计算水样中的苯酚含量（mg/L）。
来源：丁香实验
