滤膜法测定水中大肠菌群

滤膜法测定水中大肠菌群

　　一、目的要求

　　学习使用滤膜法测定水中大肠菌群。

　　二、基本原理

　　滤膜法是采用滤膜过滤器过滤水样，使其中的细菌截留在滤膜上，然后将滤膜放在适当的培养基上进行培养，大肠菌群可直接在膜上生长，从而可直接计数。所用滤膜是一种多孔硝化纤维膜或乙酸纤维膜，其孔径约0．45μm。

　　三、器材

　　伊红美蓝琼脂平板或远藤氏琼脂平板，乳糖蛋白胨发酵管内有倒置小套管），灭菌水，河水或湖水；

　　灭菌过滤器（漏斗、基座、带有孔橡皮塞的抽滤瓶分别灭菌，可用高压蒸汽灭菌），镊子，夹钳，真空泵，滤膜，烧杯等。

　　四、操作步骤

　　1．滤膜灭菌

　　 将滤膜放入装有蒸馏水的烧杯中，加热煮沸15分钟，共煮沸三次，前两次煮沸后换水洗涤2—3次再煮，以洗去滤膜上残留的溶剂。

　　2．滤膜过滤器装置

　　用无菌手续将已灭菌的过滤器基座、滤膜、漏斗和抽滤瓶按图ⅪⅤ-2装配好，其中滤膜用灭菌镊子（浸在95%酒精内，用时通过火焰灭菌）移至过滤器的基座上。其他可直接用手或夹钳操作，但不要碰到伸入抽滤瓶的橡皮塞部分，以免染菌。

　　3．将抽滤瓶接上真空泵。

　　4．加水样过滤

　　直径35mm的滤膜，所过滤的水量以培养后长出的菌落数不图ⅪⅤ-2滤膜过滤器装置多于50个为适宜。一般清洁的深井水或经处理过的河水与湖水等可取样 300—500 ml；对比较清洁的河水或湖水，可取样1-100ml；严重污染的水样可先进行稀释；未知的水样可做三个稀释度，选择菌落数合适的稀释度进行计算。本次实验于过滤器漏斗内加入比较清洁的河水或湖水100ml，加盖。

　　5．开动真空泵进行油滤。

　　6．抽完后，加入等量的灭菌水继续抽滤，目的是冲洗漏斗壁。

　　7．滤毕，关上真空泵，用灭菌镊子取滤膜边缘，将没有细菌的一面紧贴在远藤氏琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板上。滤膜与培养基之间不得有气泡。

　　8．将平板倒置于37℃下培养22—24小时。

　　9．挑取符合大肠菌群菌落特征的菌落，进行革兰氏染色、镜检。

　　10．将镜检为革兰氏阴性、无芽胞杆菌的菌落再接种一支乳糖蛋白胨发酵管，经37℃培养 24小时，产酸又产气者即为大肠菌群阳性。

　　11．计算

　　1升水样中的大肠菌群数

　　=滤膜上的大肠菌群菌落数×10

　　五、实验报告

　　1．结果

　　一升水样中的大肠菌群数是多少？

　　2．思考题

　　滤膜法检查大肠菌群有什么优点？