液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱法检测食物中罂粟壳残留

　　近几年来，随着人们生活水平的不断提高,人们越来越重视自身的健康问题,对食品的安全也越来越关注。然而有为数不少的商家和饭店为了牟取暴利，在火锅、麻辣烫、牛肉粉、烤禽类等的汤料和辅料中添加罂粟壳及其水浸物等违禁原料，使食物味道鲜美，吸引更多的回头客。此属违法犯罪行为，国家对此已明令禁止，有关部门也要求对这类违法行为进行严厉查处。为此，建立灵敏、准确、快速的罂粟壳残留检测方法，为执法提供技术鉴定依据是当务之急的事情。罂粟壳（Pericarpium papaveris）为罂粟科植物罂粟采完鸦片后的干燥成熟果壳，含有20多种生物碱，其中以吗啡（Morphine）、可待因(Codeine)、那可丁(Narcotine)、罂粟碱(Narceine)等为主要成分。吗啡分子式为C17H19NO3，熔点254～256℃，是一种白色针状结晶或结晶性粉末，有苦味，遇光易变质，溶于水，略溶于乙醇，在碱性水溶液中较易溶解。它可与多种无机酸( 如盐酸、硫酸等)和多种有机酸(如酒石酸等) 生成易溶于水的盐 。可待因分子式为C18H21NO3，易溶于氯仿、/乙醇、丙酮、戊醇，稍溶于苯、乙醚，微溶于四氯化碳和水，它与多种酸形成结晶盐。那可丁分子式为C22H23NO7，在氯仿中易溶，在苯中略溶，在乙醇或乙醚中微溶，在水中几乎不溶。罂粟碱分子式C20H21NO4，熔点147～148℃，相对密度1.337（20／4℃），易溶于苯、丙酮、热乙醇、冰醋酸，稍溶于乙醚、氯仿，不溶于水，溶于浓硫酸。吗啡、可待因、那可丁、罂粟碱这四种物质均为异喹啉型生物碱。罂粟碱罂粟壳中的这四种主要成分具有一定的药用价值，吗啡有强大的止痛作用，对各种疼痛都有镇痛效果。临床上可用于外科手术和外伤性剧痛、晚期癌症剧痛等，也用于心绞痛发作时止痛和镇静作用。可待因有镇痛、镇咳作用。罂粟碱能解除平滑肌的痉挛，并可抑制心肌的兴奋性，其盐酸盐可治疗心绞痛和动脉栓塞等症。那可丁具有止咳作用。然而，在另一方面其副作用亦不可低估，罂粟壳中的生物碱会使人嗜睡和性格改变，引起某种程度的惬意和欣快感，可造成人注意力、思维和记忆性能的衰退，长期食用会引起精神失常，出现幻觉，严重时甚至会导致呼吸停止而死亡。添加了罂粟壳的食物易使消费者成瘾，长期食用者无论从身体上还是心理上都会对其产生严重的依赖性，造成严重的毒物癖。很多受害者由此走上吸毒之路，司机食用者易发生交通事故，有的肝病患者、孕妇及婴幼儿甚至因误食而致死。食物中添加罂粟碱对人们的身心健康造成了极大的危害，对社会安全构成了威胁。
　　由于火锅、麻辣烫等食品中香料众多，要检出其中的微量生物碱干扰严重。因此十分有必要建立一种预处理方便、检测灵敏、定量准确的方法来测定食品中罂粟碱的残留量，为执法提供有力证据。目前测定食品中罂粟壳生物碱的方法主要有分光光度法、层析法、示波极谱法、高效液相色谱法等。
　　分光光度法原理为罂粟壳中的吗啡发生亚硝基化反应后与氢氧化氨形成一个紫色化合物。该化合物在420nm处有一吸收峰。同时在420nm处用2cm比色杯进行比色，在吗啡浓度0― 10mg/100mL范围内吸光度与浓度之间存在线性关系。该法检出险为吗啡0.1mg/100ml,罂粟壳1g/100ml。此方法简单快速，但因吗啡含量受多因素影响，只能作定性和半定量测定，此外提取、净化、浓缩过程繁琐复杂，检出限和回收率均不够理想。
　　层析法主要有纸层析法和薄层层析法。原理是样品提取液在层析滤纸或薄层板上展开，在紫外分析仪下观察绿色荧斑或喷洒显色剂后观察色斑，以Rf值定性，根据斑点大小和颜色深浅作概略定量。马明善等采用纸层色谱法检出险可达0.05μg罂粟碱，0.05μg/g罂粟壳。该法操作简单，但检出率低，只能作筛选试验。薄层层析法是目前研究最活跃最普遍采用的方法。由于每种薄层色谱法所使用的展开剂和显色剂不同，所以灵敏度和专一性就有所不同。涂小明建立检测吗啡、罂粟碱、可待因和那碎因四种生物碱，检出陷为吗啡、罂粟碱、可待因为1μg，那碎因为2.5μg。由于干扰物较多，定量不准确。
　　示波极谱法根据罂粟壳中吗啡亚硝基化后在碱性条件下产生一吸附催化波原理而建立。陶锐等认为各种香料对峰电位有明显干扰作用，为此，研究并建立了以stas -otto提取系统为基础的分离干扰物质的方法，该方法吗啡回收率为85.5%-93.0%，精密度RSD值为4.03%-1.85%。标准吗啡最低检出量为0.025μg/mL，样品吗啡最低检出量为0.05μg/mL。示波极谱法简便快速，但目前该法只限于吗啡定量测定。
　　高效液相色谱法一般采用C18不锈钢柱作为色谱柱，乙腈－甲醇－水或乙酸胺－甲醇作为流动相，1.0ml/min流速，检测波长为254nm或213nm，可同时定量测定吗啡、可待因、罂粟碱、那可丁的含量，灵敏度可达ng级[8,9]。
　　本实验采用液相色谱-三重四级杆质谱仪，取样品的盐酸提取液，经MCX 固相萃取柱（SPE）富集，在Atlantis 柱中经梯度洗脱分离，质谱检测采用多离子反应监测（Multiple Reaction Monitoring,MRM）方式，吗啡、可待因、罂粟碱、那可丁的检出限分别可达到0.073、0.024、0.003、0.0009 μg/L(进样量10μL)，7 次重复试验，日内精密度与日间精密度RSD 均小于10%，回收率在95%~110%以内。本法具有极高的选择性和灵敏度。