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TG-Ab测定操作规程SOP

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1272
一原理

利用人血清中TG抗体与其示踪物125I-TG进行特异结合反应,形成125I-TG-A复合物,然后加入免疫分离剂。复合物被沉淀下来,而游离的示踪物留在上清液中,离心弃上清液,测定沉淀物放射性,即能反映出血清中TG抗体的含量。

二标本采集与处理:样本采集后,应尽快分离血清。

三仪器设备和试剂

1适用仪器:上海核所日环光电仪器有限公司的SN-695型智能放免r测量仪。

2试剂:北京北方生物技术研究所

3测定步骤:

取3聚苯乙烯试管若干,用记号笔编号,然后用微量加样器按下表加样。加样前所有的试剂要平衡到室温并混匀(包括待测样品)。

试剂管别

阴性管

阳性管

待测管

TG抗体阴性血清

10

TG抗体混合阳性血清

10

待测样品

10

TG抗体缓冲液

200

200

200

125I-TG

100

100

100

混匀,任取三管测总T,取均值,37°C温育45分钟。

TG抗体羊抗人免疫分离剂

100

100

100

充分摇匀后,室温放置5-10分钟,3500转/分钟,吸弃上清液,测各沉淀管的放射性计数(p)。

四.结果分析

1.参考值:TG抗体B/T≥30%为阳性。

2.临床意义:可用于自身免疫疾病的诊断。

五注意事项

1收到试剂盒后,尽快存放在2-8°C冰箱中。

2阴性对照管在数据处理时非常重要,要做复管。

3分离剂加前一定要摇匀。

4加样时应避免血清样品间的交叉污染。

5加样前试剂要平衡到室温并摇匀。

六质量控制

1每批测定都使用北京北方生物技术研究所提供的制品做质量控制。

2阳性对照B/N≥35时药盒有效。
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