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HIV RNA定量测定标准操作规程SOP文件

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2807
1、范围

本章规定了测定HIV病毒载量常用方法的实室条件、方法、结果判定以及应用,适用于血浆中HIV病毒载量的测定。

2、规范性引用文件

GuieinesfrtheUsefAntiretrvirHIV-InfeteAutsnAesentsMMWRReentinsnReprtsApri24,1998/47(RR-5);42-82

Chirn?Prutinsert(Quntipex?HIV-RNA),L6170rev50,June1994RheAMPLICORHIVMONITOR?TESTPreureMnu

FrtinsfHIV-1SerpsitivePersnsyTNueiAiApifitinAssys,AIDSReserhnHunRetrvirus1993;(9):259-265

3、实室条件

31实室功能分区

311实室原则上应分为4个独立工作区

试剂准备区、样品处理区、扩增区和扩增产物分析区,并设在不同房间。前两区为扩增前区,后两区为扩增后区。各区的功能是:

3111试剂准备区:扩增试剂的配制、分装和保存。

3112样品处理区:样品登记、分装;核酸提取、保存和加样。

3113扩增区:核酸扩增。

3114扩增产物分析区:扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。

312扩增前区与扩增后区应严格分开,须使用不同的房间,两区之间最好有一定的间隔。

313使用商品化试剂盒可在样品处理区进行少量试剂配制。

314在满足下列操作和清洁处理要求的前提下样品处理区和试剂准备区可设在同一房间内:

3141在生物安全柜内操作。

3142每个实人员、实组分别使用各自的试剂及耗材。

3143盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。

3144用有效的方法对操作区域和共享器具在实前后进行清洁及消毒。推荐的程序是:

(1)实前将次氯酸钠溶液或70%乙醇涂布于操作台或器具表面,两分钟后用纸巾擦除。

(2)移入盛放污染材料的器皿、所需的试剂、耗材和样品,进行试。

(3)一个实区域在同一时间段只进行一种实。

(4)实结束后,移出个人专用材料至个人专用区域保管;封好污染材料盛放器皿并移至污物袋;移出共享器具至专门区域保管;将次氯酸钠溶液或70%乙醇涂布于操作台或器具表面,两分钟后用纸巾擦除;打开紫外灯照射至少15in。

315各区域的仪器、设备、器具、工作服和试剂应为该区专用,不得交叉使用。

32人员

进行HIV核酸测的人员须具有艾滋病实室的上岗资格,并接受过省级以上艾滋病实室安全及实操作技术培训。

33设施和设备

331根据测项目配备相应的设施和设备。

332各区域的设施和设备应为区域性专用,开展特定试时应根据要求在相应区域放置专用设备。以下是各区域应配备的设备:

3321试剂准备区:冰箱、洁净工作台、离心机、加样器、振荡器、废弃物容器。

3322样品处理区:冰箱、生物安全柜、离心机、加样器、振荡器、恒温水浴、上下水设备、废弃物容器。

3323扩增区:核酸扩增设备、冰箱、离心机、加样器、废弃物容器。

3324扩增产物分析区:冰箱、离心机、加样器、电泳仪、振荡器、恒温水浴、上下水设备、废弃物容器、核酸污染物处理设备等。

3325配备-80℃冰箱。

333各区域应备有工作人员专用的工作服或一次性工作服、帽子和鞋套,必要时配备防护眼镜和/或口罩。

4、方法和试剂

41方法

常用的HIVRNA定量测定方法有逆转录PCR试(RT-PCR)、核酸序列扩增试(NASBA)、分支DNA杂交试(DNA)。

42试剂

HIVRNA定量测包括DNA、RT-PCR、NASBA试剂。
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