流式细胞仪操作规程
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目的：流式细胞仪开机程序、预设获取模式文件、设定和调整、样品分析、关机程序
一．开机程序
1．查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。
2．打开储液箱，倒掉废液,并在废液桶中加入400漂白水原液。打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSF），合上压力阀。确实盖紧桶盖，查所有管路是否妥善安置。
3．将FACSCiur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY，预热5－10分钟。排出过滤器内的气泡。
4．如果需要打印，打开打印机电源。
5．打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6．执行仪器PRIME功能一次，以排除Fe中的气泡。
7．分析样品时，先用FACAF或PBS进行HIGHRUN约2分钟。做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个50离心管，不接通浓缩系统，摁下右下角白色按钮开始冲洗。待自动停止后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。
二．预设获取模式文件(AquisitinTepteFies)
1．从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个获取模式文件。
2．选取屏幕左列绘图工具中的Dtpt，绘出一个或多个DtPts（点图）。从DtPt对话框中选取Aquisitin作为图形资料来源，并确定适当的x轴和y轴参数。
3．选取屏幕左列绘图工具中的Histgr，同上法可绘出Histgr（直方图）。
4．将此视窗命名后储存于FACSttinG3BDAppitinsCELLQuestFerEXP文件夹中，下次进行相同实时可直接调用。本计算机中已设定两个模式文件：ACQ和EXP，储存于FACSttinG3BDAppitinsCELLQuestEXP文件夹中，ACQ用于细胞DNA测，EXP用于细胞表面标志分析。
三．用CELLQuest进行仪器的设定和调整
1．从苹果画面中选取CELLQuest，进入CELLQuest后在Fie指令栏中打开合适的获取模式文件。
2．从屏幕上方Aquire指令栏中，选取CnnettCyteter（快捷键：＋B）进行电脑和仪器的连机。将出现的AquisitnCntr对话框移至合适位置。
3．从Cyteter指令栏中，开启Detetrs/Aps、Thresh、Cpenstin、Sttus等四个对话框，并将它们移至屏幕右方，以便获取数据时随时调整获取条件。也可以用+1，2，3，4获得此四个对话框。
4．在Detetrs/Aps对话框中，先为每个参数选择适当的倍增模式(pifiere)：线性模式Lin或对数模式Lg。一般进行细胞表面抗原分析如分析外周血的淋巴细胞亚群时，FSC和SSC多以线性模式Lin测量，且DDMPr选择FL2，而FL1,FL2与FL3则以对数模式Lg测量；分析细胞DNA含量时，FSC，SSC，FL1，FL2，FL3皆以Lin进行测量，且DDMPr选择FL2；分析血小板表型时，FSC，SSC，FL1，FL2，FL3等均以Lg进行测量。
5．放上待测的样品，将流式细胞仪设定于RUN，流速可在HIGH或LOW上。
6．在AquisitnCntr对话框中，选取Aquire，开始获取细胞。在以下的仪器调整过程中随时选取Puse，Restrt以观察调整效果。未完全调整好之前不要去掉SETUP前的“”。
7．在Detetrs/Aps对话框中，调整FSC和SSC探测器中的信号倍增度：PMTvtges（粗调）与ApGins（细调），使样品信号出现在FSC-SSC点图内,且三群细胞合理分布。
8．在Thresh对话框中选择适当的参数设定Thresh，并调整Thresh的高低，以减少噪音信号（细胞碎片）。一般做细胞表型时用FSC－H而做DNA时用FL2－H。Thresh并不影响测器对信号的获取，但可改善画面质量。
9．从屏幕左列绘图工具中选取Regin（区域），并在靶细胞周围设定区域线，即通常所说的门。圈定合适的细胞群可使仪器调整更为容易。
10．Detetrs/Aps对话框中，调整荧光测器（FL1,FL2,FL3,FL4等）的倍增程度。根据所用的荧光阴性对照样品调整细胞群，使之分布在正确的区域内。
11．在Cpenstin对话框中，根据所用的调补偿用标准荧光样品调整双色（或多色）荧光染色所需的荧光补偿。比如应该为FL1+FL2-的细胞群却分布在FL1＋FL2＋区域内，则需调大FL2－？％FL1中的“？”，并从FL1-FL2点图中观察新的调整是否恰当
12．在Sttus对话框中可见：LserPer:正常值-Run/Rey为147W，Stny为5W；Lserurrent:正常值为6Aps左右。
13．调整好的仪器设定可在InstruentSettings对话框中储存，下次进行相同实时可调出使用，届时只需微调即可。本计算机中已有三个名叫储存于FACSttinG3BDAppitinsCELLQuestFerIMM-InstrSettings及FACSttinG3BDFiesInstruentSettingsFiesCiFie和Mst-Ce-Set的参数文件，前二者可用于分析人白细胞，后者用于分析小鼠肥大细胞。
一．开机程序
1．查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。
2．打开储液箱，倒掉废液,并在废液桶中加入400漂白水原液。打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSF），合上压力阀。确实盖紧桶盖，查所有管路是否妥善安置。
3．将FACSCiur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY，预热5－10分钟。排出过滤器内的气泡。
4．如果需要打印，打开打印机电源。
5．打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6．执行仪器PRIME功能一次，以排除Fe中的气泡。
7．分析样品时，先用FACAF或PBS进行HIGHRUN约2分钟。做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个50离心管，不接通浓缩系统，摁下右下角白色按钮开始冲洗。待自动停止后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。
二．预设获取模式文件(AquisitinTepteFies)
1．从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个获取模式文件。
2．选取屏幕左列绘图工具中的Dtpt，绘出一个或多个DtPts（点图）。从DtPt对话框中选取Aquisitin作为图形资料来源，并确定适当的x轴和y轴参数。
3．选取屏幕左列绘图工具中的Histgr，同上法可绘出Histgr（直方图）。
4．将此视窗命名后储存于FACSttinG3BDAppitinsCELLQuestFerEXP文件夹中，下次进行相同实时可直接调用。本计算机中已设定两个模式文件：ACQ和EXP，储存于FACSttinG3BDAppitinsCELLQuestEXP文件夹中，ACQ用于细胞DNA测，EXP用于细胞表面标志分析。
三．用CELLQuest进行仪器的设定和调整
1．从苹果画面中选取CELLQuest，进入CELLQuest后在Fie指令栏中打开合适的获取模式文件。
2．从屏幕上方Aquire指令栏中，选取CnnettCyteter（快捷键：＋B）进行电脑和仪器的连机。将出现的AquisitnCntr对话框移至合适位置。
3．从Cyteter指令栏中，开启Detetrs/Aps、Thresh、Cpenstin、Sttus等四个对话框，并将它们移至屏幕右方，以便获取数据时随时调整获取条件。也可以用+1，2，3，4获得此四个对话框。
4．在Detetrs/Aps对话框中，先为每个参数选择适当的倍增模式(pifiere)：线性模式Lin或对数模式Lg。一般进行细胞表面抗原分析如分析外周血的淋巴细胞亚群时，FSC和SSC多以线性模式Lin测量，且DDMPr选择FL2，而FL1,FL2与FL3则以对数模式Lg测量；分析细胞DNA含量时，FSC，SSC，FL1，FL2，FL3皆以Lin进行测量，且DDMPr选择FL2；分析血小板表型时，FSC，SSC，FL1，FL2，FL3等均以Lg进行测量。
5．放上待测的样品，将流式细胞仪设定于RUN，流速可在HIGH或LOW上。
6．在AquisitnCntr对话框中，选取Aquire，开始获取细胞。在以下的仪器调整过程中随时选取Puse，Restrt以观察调整效果。未完全调整好之前不要去掉SETUP前的“”。
7．在Detetrs/Aps对话框中，调整FSC和SSC探测器中的信号倍增度：PMTvtges（粗调）与ApGins（细调），使样品信号出现在FSC-SSC点图内,且三群细胞合理分布。
8．在Thresh对话框中选择适当的参数设定Thresh，并调整Thresh的高低，以减少噪音信号（细胞碎片）。一般做细胞表型时用FSC－H而做DNA时用FL2－H。Thresh并不影响测器对信号的获取，但可改善画面质量。
9．从屏幕左列绘图工具中选取Regin（区域），并在靶细胞周围设定区域线，即通常所说的门。圈定合适的细胞群可使仪器调整更为容易。
10．Detetrs/Aps对话框中，调整荧光测器（FL1,FL2,FL3,FL4等）的倍增程度。根据所用的荧光阴性对照样品调整细胞群，使之分布在正确的区域内。
11．在Cpenstin对话框中，根据所用的调补偿用标准荧光样品调整双色（或多色）荧光染色所需的荧光补偿。比如应该为FL1+FL2-的细胞群却分布在FL1＋FL2＋区域内，则需调大FL2－？％FL1中的“？”，并从FL1-FL2点图中观察新的调整是否恰当
12．在Sttus对话框中可见：LserPer:正常值-Run/Rey为147W，Stny为5W；Lserurrent:正常值为6Aps左右。
13．调整好的仪器设定可在InstruentSettings对话框中储存，下次进行相同实时可调出使用，届时只需微调即可。本计算机中已有三个名叫储存于FACSttinG3BDAppitinsCELLQuestFerIMM-InstrSettings及FACSttinG3BDFiesInstruentSettingsFiesCiFie和Mst-Ce-Set的参数文件，前二者可用于分析人白细胞，后者用于分析小鼠肥大细胞。
