二种方法检测耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的评价

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 作者：胡永忠 曾细英 陈雪梅

【摘要】  目的  耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的检测方法比较。方法 用K-B法，药敏纸片为头孢西丁(30μg /片)，用NCCLS规定的MRS确诊试验苯哇西林法和K-B琼脂扩散法(纸片用头孢西丁FOX)进行对比试验(对比试验和方法不作详细说明)。结果 两者方法的检出率几乎相同。结论 K-B琼脂扩散法用(FOX)简单、易行。
【关键词】  金黄色葡萄球菌  MRS   扩散法  FOX
        1  什么是耐甲氧西林葡萄球菌(MRS) 
        金黄色葡萄球菌是临床上常见的毒性较强的细菌，自从本世纪40年代青霉素问世后，金黄色葡萄球菌引起的感染性疾病受到较大的控制，但随着青霉素的广泛应用，有些金黄色葡萄球菌产生青霉素酶，能水解β-内酷胺环，表现为对青霉素的耐药。因而人们又研究出一种新的能耐青霉素酶的半合成青霉素，即甲氧西林。此药应用于临床后有效地控制金黄色葡萄球菌产酶株的感染，可时隔不久，由于抗生素的广泛应用，英国的JEVONS就首先发现了耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌。此菌已遍及全球，国内多数医院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的院内感染率已在50％以上，已成为院内感染的重要病原菌之一。因此，开展对耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的检测，对于控制医院内的感染的流行。指导临床治疗有着十分重要的意义。

 

        2  材料和方法
        2.1  51株菌株均来自于临床标本，经常规分离鉴定得到，收集本院2006--09年间标本培养分离的金黄色葡萄球菌51株，其中金黄色葡萄球菌(SA)39株，凝固酶阴性的葡萄球菌 (CNS)12株。MRS阳性参考菌株ATCC(R)43300,MRS阴性菌ATCC25923均购于省临检中心。M-H培养基购于杭州天和生物制品有限公司。抗菌药物苯唑西林(1μg /片)纸片和头孢西丁(30μg /片)购于北京天坛生物制品有限公司。 
        2.2  MRS的测定方法有很多，如纸片扩散法微量肉汤稀释法，琼脂筛选法，仪器测定法，Etest法，核酸探针技术和PCR法和Meca(l)基因法等。目前大多数医院多采用苯唑西林纸片(1μg /片)来检测，但当它的抑菌环直径在中介时就很难作出判断，那么就得用MIC法来做筛选试验，这样既耗时又费力，且上述其它方法在基层的医院又难以开展，在这种情况下我们采用一种头孢西丁(30μg /片)纸片来监测MRS，其方法简单，结果准确，重复性好。2.3  步骤:用K-B法，培养基为2% NaCl的M-H琼脂，接种物为直接菌悬液，挑选来自过夜的琼脂平板培养基，制备被检菌株悬液，调至0.5麦氏比浊管，具体操作方法如常规纸片法。贴头孢西丁纸片，35℃孵育24小时(而不是16- 18小时)，结果判断:如头孢西丁抑菌环直径≥18mm为敏感。若≤18mm则为MRS。

 

对于凝固酶阴性的金黄色葡萄球菌其抑菌环直径≥24mm为敏感。若≤24mm则为MRS。
        2.4质量控制:以金黄色葡萄球菌ATCC29213为敏感性对照菌株，金黄色葡萄球菌ATCC43300为耐药性对照菌株。药敏质控菌株与实验菌株同时进行。
        3  讨  论
        3.1  K-B琼脂扩散法方法简单，结果易判断，不需要做筛选试验。且能给临床医生提供准确、及时的药敏结果。
        3.2  MRS监测意义:对于MRS应报告对所有头孢菌素类和其它β-内酷胺类耐药，喹喏硐类药物除氟哌酸外，环丙氟哌酸、氟嗪酸有较好的抗菌活性。利福平敏感率在90%以上，未见耐万古霉素菌株，但己有万古霉素中介金黄色葡萄球菌，如疑为耐万古霉素的金黄色葡萄球菌菌株，应需送参考实验室。
参 考 文 献
[1]赵玉坤，娄金丽等.耐甲氧西林葡萄球菌的临床检测—— 中华医学检验杂志1996.19.361-363.
[2]李蓓，刘晶靖，孙竞等.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测方法的比较 郧阳医学院学报2006，1(25): 21-23. 
[3]张绍银.846株金葡菌中耐甲氧西林葡萄球菌的分离结果及耐药性分析 实用医学杂志，2005，21(3): 257-259.