juyue2010
bamboopiggy
转个带荧光的空质粒,可以根据荧光的强度,来判断瞬转的效率。
天一湖医者
用流式检测就可以了,非常方便。确定转染效率没有问题后可以转染带有目的基因的质粒。对于转染效果的验证主要取决于你的目的蛋白的性质。主要是mRNA和蛋白水平的验证。mRNA水平可以使用普通PCR或者定量PCR,前者是定性, 后者定量。但是最主要的还是蛋白水平的检测,如果是膜蛋白,那么流式检测最方便,如果是胞外分泌型那么可以用上清做ELISA或者Western都可以, 如果是胞浆分泌型的那么就用Western或者流式都可以。
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使用流式细胞术检测转染效率可以更加精确的确定转染的效率,对转染效率进行量化。
当转染的质粒DNA含有荧光蛋白基因是,可以通过荧光显微镜观察的方法来确定转染的效率,在荧光显微镜下,可以观察到荧光的强弱以及荧光的效率。
府宅
荧光定量PCR所检测的是转染后细胞中待测基因的mRNA的表达水平;
Western Blot所检测的是组织或者细胞中蛋白质的表达水平。
他们都可评价