不常见革兰阴性菌的快速鉴定方法

互联网2015-01-05

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病原学检测对于感染性疾病的诊断和治疗非常重要，因此，临床<a target="_blank">微生物</a><a target="_blank">实验室</a>在医院感染治疗和控制中起到关键作用。目前，大部分临床<a target="_blank">微生物</a><a target="_blank">实验室</a>采用商品化的鉴定系统鉴定临床分离的<a target="_blank">细菌</a>，但是对于一些临床不常见的<a target="_blank">细菌</a>，传统的鉴定方法(如革兰染色、<a target="_blank">生化</a>反应等)更加实用有效。因此，本文参照CLSI M32-A2文件列举了一些临床不常见细菌的特征和鉴定方法，希望对临床微生物实验室的常规工作有所帮助。

一. 不常见革兰阴性菌

1. 布氏杆菌属

布氏杆菌属是一类革兰阴性细小杆菌，牛、羊、猪等动物最易感染。人类接触带菌动物或食用病畜及其乳制品，均可被感染。布氏杆菌病广泛分布世界各地，我国部分地区曾有流行。布氏杆菌属分为羊、牛、猪、鼠、绵羊及犬布氏杆菌6个种，20个生物型。中国流行的主要是羊、牛、猪三种布氏杆菌，其中以羊布氏杆菌病最为多见。

布氏杆菌属细菌为非抗酸性，无芽胞，无荚膜，无鞭毛，呈球杆状(见图1)。血琼脂(BAP)上为透明或半透明、光滑且有光泽菌落。此细菌不在麦康凯琼脂上生长。布氏杆菌属细菌尿素阳性，触酶、氧化酶阳性，而吲哚阴性。由于该菌属细菌具有强的传染性，因此一旦怀疑应送往LRN B级参考实验室进行确认。

2. 空肠弯曲菌

空肠弯曲菌是一种人畜共患病病原菌，可以引起人和动物发生多种疾病，并且是一种食物源性病原菌，认为是引起全世界人类细菌性腹泻的主要原因。其致病因素包括粘附、侵袭、产生毒素和分子模拟机制等四个方面，通过分子模拟机制可以引起最严重的并发症一格林一巴利综合征。空肠弯曲菌可以通过产生细胞紧张性肠毒素、细胞毒素和细胞致死性膨胀毒素而致病。空肠弯曲菌对红霉素、新霉素、庆大霉素、四环素、氯霉素、卡那霉素等抗生素敏感，但近年发现了不少耐药菌株及多重耐药性菌株。

空肠弯曲菌菌体轻度弯曲似逗点状。菌体一端或两端有鞭毛，运动活泼，在暗视野镜下观察似飞蝇。有荚膜，不形成芽胞。微需氧菌，在含2.5～5% 氧和10% CO2的环境中生长最好，在正常大气或无氧环境中均不能生长，最适温度为37～42℃。本菌在普通培养基上难以生长，在凝固血清和血琼脂培养基上培养36 小时可见无色半透明毛玻璃样小菌落，单个菌落呈中心凸起，周边不规则，无溶血现象。空肠弯曲生化反应不活泼，不发酵糖类，不分解尿素。可还原硝酸盐，氧化酶和触酶为阳性。能产生微量或不产生硫化氢，甲基红和v-p试验阴性，枸椽酸盐培养基中不生长,在弯曲菌中马尿酸呈阳性反应具有重要鉴定价值。

3.“HACEK”群细菌

HACEK是指一组革兰阴性杆菌：嗜血杆菌属(H)、放线杆菌属(A)、人心杆菌属(C)、艾肯菌属(E)、金氏杆菌属(K)。这组微生物的共同特征是易导致心内膜感染，约占全部感染性心内膜炎的5-10%，它们是导致正常人群(非静脉药物滥用者)心内膜炎的常见原因之一。所有这些微生物都是口咽部正常菌群的一部分，生长缓慢、喜好富二氧化碳环境。除心脏瓣膜感染，HACEK菌还导致其他感染：菌血症、各类脓肿、腹膜炎、中耳炎、结膜炎、肺炎、化脓性关节炎、骨髓炎、尿路感染、伤口感染、脑脓肿、牙周感染。

嗜血杆菌属因在生长过程中需含有生长因子X(氯化高铁血红素)和(或)V(辅酶Ⅰ)的血液琼脂而得名。本属细菌为革兰阴性小杆菌，无动力，具有明显的多型性，不形成芽胞，需氧或兼性厌氧。流感嗜血杆菌是嗜血杆菌属最重要的病原菌，镜下呈球杆状、长杆状、少数为丝状。粘液型菌株有荚膜，毒力较强。菌落一般为光滑型，若与金黄色葡萄球菌在BAP上共同孵育，则在葡萄球菌菌落周围生长的流感嗜血杆菌菌落较大，这叫做“卫星现象”。原因是金黄色葡萄球菌能合成较多的V因子，促进流感嗜血杆菌的生长。

放线杆菌属为革兰阴性杆菌，有时呈球形、椭圆形(见图3)。兼性厌氧菌，无动力，无荚膜，在含血清或血液的培养基上生长良好，37℃培养2～3天后形成直径约1mm的菌落。在肉汤培养液中生长呈颗粒状。对人或动物致病的有伴放线放线杆菌、林氏放线杆菌和马驹放线杆菌。伴放线放线杆菌因常见于人类的某些放线菌病的病灶中而得名。但也可单独致病，如一些亚急性细菌性心内膜炎是由本菌引起的。本属细菌能还原硝酸盐，不产生吲哚，尿素阳性。

人心杆菌是心杆菌属内唯一的种，是人的鼻腔和咽喉部的正常菌群，可引起心内膜炎、尿路感染、脑脓肿和牙周炎等疾病。大部分菌株可从血液中分离而来，有的菌株也可从脑脊液中分离而来。人心杆菌为无鞭毛、无荚膜、无芽孢，并具有多形性的革兰阴性杆菌(见图4)。革兰染色不易被脱色，单个存在或成对排列，有时形成短链或呈葡萄状排列。该菌为兼性厌氧菌，某些菌株在初代分离时需要CO2，在生长过程中要有一定湿度，在干燥环境中不生长；在35～37 ℃均可生长，但在22 ℃或42 ℃均不生长。该菌在BAP上不溶血，经24h 培养后菌落很小，48h 后可达1mm，菌落为圆形、凸起、光滑、有光泽而边缘整齐，某些菌株的菌落可长入培养基中，使培养基表面琼脂凹陷。麦康凯琼脂上不生长。人心杆菌氧化酶阳性，触酶阴性，吲哚阳性，不还原硝酸盐。

啮蚀艾肯菌是革兰阴性多形性球杆菌(见图5)，有一种漂白剂的气味，兼性厌氧，是口腔和许多其他粘膜表面的正常菌群。啮蚀艾肯菌是人咬伤后发生的蜂窝织炎的病原体，它也是已发现静脉药物滥用者软组织感染和心内膜炎主要病原体。它也能导致各种各样的肺部感染(如脓胸、肺炎、败血症栓子)，类似严格偏性厌气菌。

大多数啮蚀艾肯菌性心内膜炎患者有潜在的生物瓣膜病变。与其他HACEK菌不同，大多数啮蚀艾肯菌性心内膜炎与静脉药物滥用有关。啮蚀艾肯菌在培养基上凹陷生长，吲哚阴性，鸟氨酸阳性。

金氏杆菌属是革兰阴性球杆菌(见图6)，有3个种：

金氏金氏杆菌、产吲哚金氏杆菌、去硝化金氏杆菌，只有金氏金氏杆菌引起心内膜炎。与其他HACEK菌不同，金氏杆菌感染进展相当迅速。金氏金氏杆菌在 BAP呈大的、光滑、不透明、白色或米色、β-溶血菌落，与肠杆菌科细菌相似，但在麦康凯琼脂上不生长。金氏金氏杆菌触酶阴性，氧化酶阳性，通常分离自无菌组织和体液。

4. 土拉热弗朗西斯氏菌

土拉热弗朗西斯氏菌简称土拉弗氏菌，是引起土拉弗氏菌病(野兔热)的病原菌。人类感染此病多因接触患病动物而致，或摄食污染食物和吸入污染空气所致。土拉杆菌是革兰阴性多形性细菌，镜下呈球状、杆状、豆状和丝状等，无芽胞、无动力、有荚膜。该菌营养要求较高，在普通琼脂培养基和肉汤中均不生长，只在加入

胱氨酸、半胱氨酸、血液或卵黄的培养基中生长，形成圆形、光滑、灰色、凸起、有粘性的菌落，在鸡胚绒尿膜上也能生长，在卵黄囊中生长尤为茂盛，最适生长温度35℃ ～37℃ 。若从动物或人体初次分离，一般需要3—5天。常用培养基主要有半胱氨酸葡萄糖血液琼脂平板(Francis培养基)、卵黄琼脂平板和半胱氨酸巧克力琼脂。土拉热弗朗西斯氏菌氧化酶阴性，触酶阴性或弱阳性，β-内酰胺酶阳性。由于该菌具有强传染性，必须在<a target="_blank">生物安全</a>柜中处理，一旦怀疑需送往LRN参考实验室进行确认。