标记免疫分析技术概述

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一、概要

 定义：应用广泛、先进的免疫分析技术，是生物活性物质分析方法的新领域；基本技术是将多种标记示踪技术和高度灵敏性和医学免疫学抗原抗体反应的高度特异性相结合的分析技术。

 

 

 特点：灵敏度高，特异性强，重复性好，准确性高，操作简便，易于自动化商品化。

 

 发展：放射免疫分析，免疫放射分析，酶标记免疫分析，化学发光免疫分析，电化学发光免疫分析，荧光免疫分析，金属离子免疫分析。

 应用：医学诊断，治疗监测，还可应用于药物监测，食品，兽医学，环境监测。

 

 

二、放射免疫分析，免疫放射分析

 

  1959年，Yalow,Berson创始发放射免疫分析（RIA），1968年，Miles,hales建立免疫放射分析（IRMA）。20世纪80年代中后期在许多科研院所和各级医院的应用范围达到相当普及的程度。

 

 放射免疫分析原理：放射性标记（I125）抗原和非标记抗原（待测物）同时与限量的特异抗体进行竟争结合反应，通过分离未结合的标记抗原，测定标记抗原与抗体的复合物放射强度信号，经相应的数学函数关系推算待测抗原的含量。此法也叫竟争性放射免疫分析。             反应式：Aundefined + Ag + Ab（限量）→Aundefined-Ab + Ag-Ab + Aundefined 。反应式中，Ab为限量，Aundefined与Ag理化性质相同，Ab      要求与抗原有较高亲和力，较高的滴度和高特异性。          

  免疫放射分析（IRMA）原理：过量的标记（I125）抗体直接与待测抗原结合，经与游离标记抗体分离，去除游离标记杭体，测定复合物的放射性计数，计算待测物含量。反应式：Ag + Aundefined过量）→ Ag-Aundefined+Aundefined 。 

IRMA方法分两种，一种为单位点IRMA法，另一种为双位点IRMA法。单位点IRMA中抗原分子只需一个反应位点决定簇，与标记抗体上一个相应结合点反应，形成复合物后分离游离的标记抗体；双位点IRMA也称双抗夹心法，采用固相抗体与标记抗体同时与待测抗原的两个反应位点决定簇结合，形成待测抗原夹在两抗体分子中间，通过洗涤，分离游离的标记抗体，帮非待异结合（NSB）较低，大提高了测定灵敏度。

 

 

在双位点IRMA反应体系中，过量固相包被抗体与待测抗原结合后，再与过量I125 标记抗体进行结合反应，形成“固相抗体-待测抗原-酶标记抗体”夹心复合物，经洗涤去除多余游离的标记抗体，复合物上的标记I125作为信号产物直接进行放射计数测量，通过相应函数曲线计算待测物抗原含量。

 

特点：灵敏度高，特异性好，但放射性标记物存在人体危害、环境污染且半衰期短，限制了使用和发展。