钠钾氯测定方法学评价及标本要求
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一、钠、钾测定
(一)标本要求
血浆或全血钾比血清低0.2~0.5mmol/L,是因为血液凝固时血小板破裂释放出一部分K+。因此,报告时必须注明是血清还是血浆。
测血钾时,无论是血清还是血浆标本一定不能溶血,轻微溶血(500mgHb/L)就可引起血钾升高3%。
维持细胞内外钾平衡是依靠细胞膜上的Na+-K+ATP酶,如果分析前全血标本被冷藏过,糖酵解被抑制,Na+-K+ATP酶不能维持内外平衡,而造成细胞内钾外移,使测定结果增高。在25℃存放1.5小时,血清钾会增高0.2mmol/L,4℃存放5小时会增高2 mmol/L。
相反,也会因为标本分离前被储存在37℃,由于糖酵解增强,使血钾进入到细胞内而血钾降低。如果白细胞数量增加,即便在室温放置也会引起血钾降低。
血钠测定标本可以在2~4℃或冰冻存放,红细胞中仅含血浆中的1/10,即便是溶血也不会造成多大影响。
脂血标本可高速离心分离后用离子选择电极方法检测。
(二)测定方法
1.火焰光度法 火焰光度法(FES)是一种发射光谱分析法,具有精密度高、特异性好以及成本低廉等特点,被推荐为血清(浆)钠、钾测定的参考方法。
2. 离子选择电极法 离子选择电极法(ISE)仪器上装有含玻璃膜的钠电极和含液态离子交换膜(渗有缬氨霉素)的钾电极。ISE检测原理是检测电极表面电位的改变,比较测定电极与参比电极表面电位变化的差值大小来估计样本中含量。
3. 分光光度法 分光光度法分为两类:一类是酶法,另一类是Na+、K+被结合到一类大环发色团时发生光谱的改变。
(1)酶法:Na+测定的酶法原理是在Na+离子存在下β-半乳糖苷酶水解邻-硝基酚-β-D-半乳吡喃糖苷(o-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside,ONPG),在420nm波长可测定产物邻-硝基酚(发色团)颜色产生的速率。
K+测定酶法例子是利用色氨酸酶,一定量的K+会增强酶的活性,用测定该反应酶活性的改变来判断K+浓度。酶法的精密度和准确度可以与火焰光度法比较,但胆红素及溶血有一些影响,脂血标本因影响大而不能测定。
(2)大环发色团法