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常规血液分析标准化的进展及质量管理

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<font><span>上海市<a target="_blank"><u>临床检验</u></a>中心 胡晓波</span> </font>

<font><span>数十年来,国际血液学标准化委员会(ICSH)先后推荐了血红蛋白测定(J Clin Pathol,1996年),血细胞压积(J Clin Pathol,1980年)和红细胞、白细胞计数(Clin Lab Haematol,1994年)的参考方法。由于种种原因,血小板计数的参考方法直到2001年才正式公布,成为传统CBC计数 校准、确定<a target="_blank"><u>血液分析仪</u></a>校准品靶值的可靠依据(Am J Clin Pathol,2001年)。现将ICSH有关血小板计数的参考方法介绍如下。<br /> 一、血小板计数参考方法<br /> ICSH曾经推荐过数种血小板计数的侯选方法,如(1)以草酸铵稀释-相差显 微镜法计数血小板;(2)电阻抗法测定RBC/PLT比率。但是,这些方法很难成为准确的、精确的、可靠的血小板计数参考方法, 原因有二:(1)血小板很难与细胞碎片、背景噪音鉴别;(2)大量红细胞会干扰血小板计数。<br /> 随着流式细胞仪普及应用,使血小板直接计数成为可能。一系列血小板标志物(包 括静息或激活),如抗CD42,CD41,CD61等单抗,可以标记循环血液中所有血小板,包括独立血小板,黏附于红细胞的血小 板,黏附于白细胞的血小板等,通过恰当稀释,运用流式细胞术能很好将血小板群体分离出来,为准确计数血小板成为可能。<br /> ICSH推荐的间接血小板计数,即采用流式细胞仪计数PLT与RBC相对数量 ,同时采用半自动、单通道、电阻抗颗粒计数仪准确计数红细胞,通过准确和精确的方法,可以确定血液中血小板数量。<br /> (一)、方法学原理<br /> 无菌缓冲液预稀释的EDTA抗凝全血,用特异性荧光标记单克隆抗体染色血小板 。溶液中被染色的血小板稀释成计数浓度,在流式细胞仪上根据荧光强度和散射光计数PLT和RBC。通过RBC/PLT比率测定值 ,和准确的RBC计数值就可得出准确的血小板计数值。<br /> (二)、血液标本<br /> EDTA抗凝的新鲜静脉血液标本(3.7-5.4μmol/ml血液),即K 2EDTA(分子量368.4)浓度为1.4-2.0mg/ml血,K3EDTA(分子量442.5)浓度为1.6-2.4mg /ml血。若需同时测定HCT和MCV值,推荐采用K2EDTA抗凝血。标本放置于室温(18-22℃),4小时内处理完毕。<br /> (三)、玻璃器皿<br /> 贮存或稀释标本用的容器避免发生血小板黏附,不能采用平底玻璃器皿。推荐采用 聚丙烯或聚苯乙烯材料制成的容器。<br /> (四)、仪器性能<br /> 对于红细胞计数和血小板计数,采用能测量前向散射光和荧光的流式细胞仪。仪器 必须有足够的敏感度来分析FITC标记的、直径2μm球形颗粒的散射光和荧光。<br /> 对于全血红细胞计数,采用半自动、单通道、电阻抗颗粒计数仪。仪器测量孔必须 直径80-100μm,长度是直径的70%-100%。容积误差1%以内,并可溯源到国家或国际标准。<br /> (五)、试剂<br /> 1、稀释液:0.01mol/lPBS,pH7.2-7.4,含1%小牛血清 (BSA)。<br /> 2、染色液:FITC直接标记的能识别血小板GPIIb/IIIa复合物2种 表位的单抗:CD41和CD61。商品FITC标记抗血小板抗体有:抗CD61(clone RUU-PL7F12,Becton Dickinson公司)和抗CD41(clone P2,Beckman Coulter公司)。推荐采用双标记染色法.</span> </font>

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