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1938
今天参加了BD组织的一个学术交流会,会上JAY Dong博士介绍了JEM杂志在今年七月发表的一篇文章,发现CD127可以替代FoxP3成为特异性识别调节性T细胞的新标志。该方法利用CD127、CD25和CD4三标法识别、分选、分型人调节性T细胞,得到较exciting的结果。
介绍:
自身免疫性疾病主要特征是免疫系统在识别“自我”与“非我”时出现差错。尽管绝大多数自身免疫性T细胞在胸腺成熟过程中被调节分化后去除,但正常人体中总是带有部分自身反应性细胞。调节性T细胞是一种免疫调节细胞,它的作用是使机体能够通过调节外周免疫耐受来控制自身性疾病。人体中几种调节性细胞包括CD4+调节性T细胞、Th3细胞、Tr1细胞和CD8+调节细胞。自然生成的调节性T细胞主要在胸腺中发育并经自身抗原刺激后在胸腺内被阳性性选择。自然形成的调节性T细胞占CD4+群体的5-10%,最早可见于T淋巴细胞发育的第一阶段。致使T细胞向调节性T细胞分化的信号是通过在胸腺基质上T细胞受体和MHCII类复合物之间的交互发生的。人类中,自然生成的调节性T细胞表达CD4和CD25(CD4+CD25int-hi),同时FoxP3也阳性。实验显示敲除IL-2受体(CD25或CD122)或它的配体IL-2都可导致CD4+CD25+细胞数据降低,从而证明了CD25在调节性T细胞发育过程中的重要作用。Foxp3研究简史Foxp3基因的编码产物为一个48-kDa的蛋白质scurfin,其特征性结构为蛋白C 端的叉头螺(forkhead/winged helix)结构,这一结构域内的蛋白质属于DNA结合因子 家族成员之一。

在人类和鼠类中,FoxP3突变与遗传性自身免疫性疾病有关。其他类型的T调节细胞可在外周发育,它们分别和Tr1和Th3类型的调节性细胞。Tr1细胞CD4+CD25-FoxP3-,并通过分泌IL-10来发挥调节免疫功能作用。Th3前体细胞与Tr1细胞类似,表型也为CD4+CD25-FoxP3-。体外用TGFb刺激CD4+CD25-FoxP3-可使其转化为CD4+CD25+FoxP3+细胞,随后这些细胞也可分泌TGFb。现对CD8+调节性T细胞的研究还不充分,有报道称其在体外可抑CD4+细胞。这个结论是在发现CD8+调节性T细胞经CD3抗体刺激后可抑制CD4 T细胞的增殖而做出的。从本例中可看出,调节功能还涉及细胞与细胞之间的接触机制。这些细胞也表达T调节性细胞的标志物,如CD25和FoxP3,后者是经抗CD3抗体刺激后产生的。



人调节性T细胞表面标志物稳定表达CD25被认为是调节性T细胞的显著特征。细胞调节功能则集中体现在强表达CD25的CD4+T细胞上(CD4+CD25hi)。感染免疫应答后被活化的T细胞也表达CD25,从而使得区分调节性T细胞和活化T细胞变得十分困难。现在还缺乏定义CD25低表达和高表达的标准,从而影响了通过分选获得调节性T细胞。由于这个因素使得一些研究学者只能获得高表达CD25的调节性T细胞,造成部分调节性T细胞的丢失。调节性T细胞在细胞表面及胞浆内表达CTLA-4(CD152),它是细胞免疫的负反馈调节因子;表达TNFRSF-18,也称作GITR,属于TNF超家族。活化的非调节性T细胞表达会增加表达CD25、GITR和CD152,说明这些分子也不能用于定义调节性T细胞,且现在发现不是所有的调节性T细胞都会表达以上这些分子。如能发现一种唯一性的调节性T细胞标记物有助于解决以上所有的问题。



CD127表达识别人调节性T细胞

目前为止,识别调节性T细胞最敏感的指标是FoxP3。但是检测这个指标需要对细胞进行破膜,使得一旦通过此方法检测后细胞将无法再培养或进行下步实验。来自Barbara Fazekas de St. Groth (Centenary Institute of Cancer Medicine and Cell Biology, Sydney, Australia)和Jeffrey Bluestone (UCSF Diabetes Center, San Francisco, CA)及BD实验最新的研究结果发现,调节性T细胞下调表达CD127。CD127是IL-7受体一部分,IL-7受体则是由CD127和其他细胞因子受体通用链(IL-2R, IL-4R, IL-9R,IL-15R, and IL-21R)构成的,CD127在T细胞前体、B细胞前体、成熟T细胞、成熟单核细胞其他一些淋系和髓系细胞上表达。研究发现IL-7R在T细胞的增殖和分化和成熟中起重要作用,体内实验发现T细胞活化后CD127蛋白下调表达。T细胞CD127的下调表达与CD25中等-强表达具有良好的相关系,通过胞浆FoxP3染色证实可用于识别调节性T细胞。如图2显示,CD4细胞经分选被为分CD127-高表达,CD25中等-偏弱表达(CD127hiCD25int-lo)和CD127弱表达CD25高-中等表达(CD127loCD25hi-int)两个细胞群体。所有的调节性T细胞均存在于CD127loCD25hi-int群体内。经分选的CD127loCD25hi-int细胞群体阳性表达FoxP3,而CD127hiCD25int-lo群体则完全不表达FoxP3。从人类外周血单个核细胞中分选有活性T调节方法简述如下:通过BD IMag™ Human CD4 T细胞富集试剂盒分选CD4+细胞。在日常分选中此法可纯度可达90%以上。细胞随后经FITC标记CD25和PE标记CD127,PerCP或PE-CY7标记CD4抗体进行染色。细胞在BD FACSAria™ 分选型流式细胞仪上进行分选。运用图2所示的设门方法分别分选CD127hiCD25int-lo和CD127loCD25hi-int两个细胞群体。分选细胞经FoxP3染色发现CD127loCD25hi-int细胞表达FoxP3,而CD127hiCD25int-lo群体则完全没有信号(图2B)

摘要
BD Biosciences和其他实验室结果显示人类调节性T细胞可通过CD127低表达进行识别。它的表达与FoxP3表达极其一致,并且与CD4细胞中等、高表达CD25也相一致。这个标志明显优于检测胞浆内FoxP3检测方法,适用于体外培养与分析。另一优点在于使用些标志进行分选所得的T调节性细胞得率明显增加。而使用高表达CD25方法识别调节性T细胞进行分选,其得率往往在0.6%到7.9%之间。使用低表达CD127联合CD25,结合我们的设门方法可获得CD25低表达的调节性T细胞,从而提高了分选得率。这种方法使得调节性T细胞的得率提高2-4个数量级而不含有CD25中等表达的非调节性T细胞。
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