【交流】辛酸-硫酸铵法纯化单克隆抗体

1试剂
(1)  小鼠腹水
(2)  饱和硫酸铵溶液的配制:
　　称(NH4)2SO4(AR)400～425克，以50～80℃之蒸馏水500ml溶解，搅拌20分钟，趁热过滤。冷却后以浓氨水(15N　NH4OH)调PH至7.4。配制好的饱和硫酸铵，瓶底应有结晶析出。
(3)   0.06M, PH4.8醋酸盐缓冲液配制:) `0 }2 j2 v. ] ^
　　贮存液:' ~. o6 \5 o5 W1 [7 h
　　A液：0.06M NaAc：无水NaAc0.49218克，加蒸馏水至100ml；& q0 o: @; i6 S
　　B液: 0.06M HAc：冰醋酸0.344ml，加蒸馏水至100ml；7 L) undefined n4 q# C+ l( a
　　应用液：取A液59ml加B液41ml混合，用5M NaOH调PH值至4.8。
(4)   0.1M, PH7.4磷酸盐缓冲液(PBS)配制:
取Na2HPO4•12H2O 28.94克,KH2PO42.61克, 加蒸馏水至1000ml.
(5)  含137mM NaCl,2.6mM KCl,0.2mM EDTA的PH磷酸盐缓冲液(PBS):取Na2HPO4•12H2O 28.94克,KH2PO42.61克, NaCl8.0克, KCl0.2克,EDTA0.06克, 加蒸馏水至1000ml.
2器材
普通冰箱、离心机、电磁搅拌器，751桮型紫外分光光度计、扭力天平，粗天平。透析袋、尼龙绳、细竹棒、精密PH试纸(PH5.5～9.0)、眼科镊子、小剪刀。烧杯、量筒、吸管、滴管、灭菌小瓶、试管等。
3操作步骤
(1)  腹水4度 离心12000 rpm,15min，除去杂质.
(2)  取1份腹水与2份醋酸盐缓冲液混合,室温搅拌下逐滴加入正辛酸33ul/ml腹水.
(3)  室温混合30min.
(4)  4度静置2小时以上,使其充分沉淀.
(5)  4度 离心12000 rpm,30min,弃沉淀.
(6)  上清于50倍体积的0.01M PH7.4 PBS中,4℃透析过夜.
(7)  在透析后的上清中加入等体积饱和硫酸铵溶液.
(8)  4度静置1小时以上.
(9)  z, o4度 离心10000 rpm,30min,弃上清.
(10)  沉淀用适量含137mM NaCl,2.6mM KCl,0.2mM EDTA的PH磷酸盐缓冲液(PBS)溶解,于50-100倍体积的上述PBS中4℃透析过夜.
(11)  取少量透析后样品适当稀释后,以紫外分光光度计检测蛋白含量,SDS-PAGE检测抗体 纯度.