【共享】淋巴细胞转化实验

(1)原理：T淋巴细胞与有丝分裂原在体外共同培养时，受到后者的刺激可发生形态学和生物化学的变化，部分小淋巴细胞转化为不成熟的母细胞，并进行有丝分裂，这种方法称为淋巴细胞转化试验(lymphocyte transformation test)。
(2)试剂：①1640培养液：广州威佳科技，临用前加入20%犊牛血清（灭活），青链霉素各100IU／ml，用5.6%NaHCO3（经高压灭菌）校正pH7.2～7.4，是为应用培养液。
②PHA溶液：上海伊华医学科技有限公司,批号：20040301。
③Hank’s液：贮存液：氯化钠80g；氯化钾4g；Na2HPO4•12H2O 1.52g；KH2PO4 0.6g；葡萄糖10g。加适量蒸馏水溶解后，加入0.4%酚红液50ml，再加蒸馏水至1000ml。置4℃冰箱中保存备用。临用前将贮存液用蒸馏水1:10稀释，用5.6%NaHCO3校正pH7.2～7.4。
④低渗溶液：KCL2.79g溶于蒸馏水500ml中。高压灭菌后备用。
⑤姬姆萨－瑞特氏混合染色液。
(3) 实验步骤：
①取2支试管分为试验管和对照管，各加入1640培养液3ml，犊牛血清0.5ml。试验管加PHA，对照管不加PHA。两管各加胶塞，于37℃恒温箱内培养72h，每天轻轻旋转混匀2次。
②将上述试管从温箱中取出，用毛细吸管吸出上清液弃去，于试管内加入低渗溶液5ml，轻轻冲打混匀、以2000rpm离心5min，吸弃上清液，沉淀物加Hank’s液5ml，再以2000rpm离心10min，吸弃上清液，用沉淀物涂片。
③用姬姆萨－瑞特氏混合染色液染色，在油镜下计数200个淋巴细胞，按下列公式计算淋巴细胞转化率。
淋巴细胞转化率＝
④转化和未转化淋巴细胞形态学特征
由小淋巴细胞向淋巴母细胞转化的形态学改变的一般规律是：整个细胞和核都增大；胞浆比例加大，其嗜碱性增强；核质疏松，核内可见核仁；胞浆内有空泡形成等。
a.成熟的小淋巴细胞：其大小和形态与末梢血片中未经培养的淋巴细胞一致。核质致密，染呈蓝紫色。胞浆比例甚小，常在核的一边呈弯月形，染呈淡蓝色。
b.过渡型淋巴细胞：是处在转化过程的淋巴细胞，已开始具有淋巴母细胞的某些特征，其体积比成熟的小淋巴细胞增大，核较疏松，可见有核仁，胞浆增多，染呈蓝色。
c.淋巴母细胞：体积比成熟小淋巴细胞大3～4倍，核亦显著增大，核质疏松，有数个明显的核仁，核和胞浆常出现多个空泡。胞浆比例大，其外形不规则，嗜碱性明显增强。
d.核分裂相细胞：核体呈现有丝分裂，细胞内可见数对至数十对染色体。
以上b、c、d型均计入转化淋巴细胞类。