原理
正常机体的T淋巴细胞在体外培养过程中受到特异性抗原或有丝分裂原刺激。可转化为淋巴母细胞。细胞免疫缺陷时，患恶性肿瘤或某些其他疾病时。转化率显然降低。基本原理是采用T淋巴细胞敏感 的刺激物在体外刺激T淋巴细胞，T淋巴细胞受到刺激后可发生形态学和生物化学的变化，部分小淋巴细胞转化为不成熟的母细 胞，并进行有丝分裂。用形态学法或放射性 核素法检测T细胞的增值程度，并以此评定相应的细胞功能。
材料与仪器
肝素
199培养液 小牛血清 链霉素 青霉素 PHA
注射器 针头 试管 吸管 离心机
199培养液 小牛血清 链霉素 青霉素 PHA
注射器 针头 试管 吸管 离心机
步骤
1. 采肝素抗凝血1~2毫升（1毫升血中加肝素20单位）充分混匀。37℃静置1~2小时。红细胞沉淀后，吸取血浆层并捎带些红细胞。移入另一无菌试管中。计算白细胞数然后2000 rpm 离心10分钟。弃上清液。用199培养液将沉淀的白细胞配成1x107/毫升细胞悬液。
2. 取细胞悬液0.6毫升（6x106细胞）加入含有2.4毫升199培养液的培养瓶中。
3. 按每毫升营养液加30 ug PHA加入PHA。
4. 37℃孵育68~72小时。培养过程中，每天翻动培养瓶1~2次。
5. 培养后。振荡培养瓶。将细胞重新悬起，然后移入试管中。
6. 1000 rpm 离心5分钟。
7. 尽量弃去上清液，将沉淀物混匀，取一滴放在载玻片上，推成血膜（头、体、尾分明）干燥，用瑞特氏染液染色）镜检。
8. 计算淋巴细胞的转化率：油镜下观察每张玻片的头、体、尾三段。每段各一纵列（目的是减少推片中细胞分布不均的误差）。
9. 每张玻片记数200~400个细胞，计算转化率其中头部50~100，体部50~100，尾部100~200细胞。 一般认为转化率的正常值为60~70%
注意事项
1. 培养基成分对转化率影响较大，注意其有效期限。
2. 小牛血清用前需要灭活。
3. 培养时要保证足够的气体，保证无菌。
4. PHA剂量过大会对细胞有毒性，PHA转化反应剂量一般10ml，培养瓶内液体总量不要超过2ml，太小不足以次级淋巴细胞转化，实验前先测定。
常见问题
淋巴细胞的转化标准
1. 计算淋巴细胞的转化率：油镜下观察每张玻片的头、体、尾三段。每段各一纵列（目的是减少推片中细胞分布不均的误差）
公式：淋巴细胞转化率=转化淋巴细胞数/（转化淋巴细胞数+未转化淋巴细胞数）×100%
2. 每张玻片记数200-400个细胞，计算转化率其中头部50-100，体部50-100，尾部100-200细胞。 一般认为转化率的正常值为60-70% ；
3. 目前最常用植物血凝素（PHA）作为分裂原来检测受试者的淋巴细胞转化率，从而判定其细胞免疫功能，称为PHA刺激淋巴细胞转化实验。
来源：丁香实验
