原理
T 细胞在体外培养时，受到非特异性有丝分裂原（如PHA、ConA）刺激后，可出现细胞体积增大，代谢旺盛，蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母细胞转化。淋巴细胞转化率的高低可以反映机体的细胞免疫水平，因此可作为测定机体免疫功能的指标之一。
淋巴细胞转化试验有形态计数法、MTT 法和同位素法三种。
MTT 法即四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法。MTT 是一种噻唑盐，化学名3-（4，5-二甲基-2-噻唑）-2，5-二苯基溴化四唑，水溶液为黄橙色。小鼠脾细胞受到ConA 作用后发生增殖活化，其胞内线粒体琥珀酸脱氢酶活性相应升高，MTT 作为其底物参与反应，形成蓝色的甲臜（Formazan）颗粒沉积于细胞内或细胞周围，经盐酸─异丙醇溶解后为蓝色溶液，可用酶标测定仪测定细胞培养物的OD 值，测定波长570 nm。根据OD 值的大小计算反应体系中细胞增殖程度。
3H-TdR 掺入法：细胞增殖的基本条件或前提为细胞质和细胞核的复制，这是正常细胞增殖过程缺一不可的前提。一般来说，一个细胞周期可大致分为四期，即G1 期、S期、G2 期和M期。其中S期为DNA合成期，主要功能活动为DNA合成。3H-TdR即（甲基-3H）胸腺嘧啶核苷（[3H-methyl]thymidine），是DNA合成的前体。加入细胞培养液中后被细胞摄取作为DNA合成的原料。细胞合成的DNA越多，则所掺入的3H-TdR就越多，因此，检测所掺入的3H-TdR就可反映细胞增殖的程度。因该方法有同位素污染问题，故我们实习中仍用MTT法。
3H-TdR 掺入法：细胞增殖的基本条件或前提为细胞质和细胞核的复制，这是正常细胞增殖过程缺一不可的前提。一般来说，一个细胞周期可大致分为四期，即G1 期、S期、G2 期和M期。其中S期为DNA合成期，主要功能活动为DNA合成。3H-TdR即（甲基-3H）胸腺嘧啶核苷（[3H-methyl]thymidine），是DNA合成的前体。加入细胞培养液中后被细胞摄取作为DNA合成的原料。细胞合成的DNA越多，则所掺入的3H-TdR就越多，因此，检测所掺入的3H-TdR就可反映细胞增殖的程度。因该方法有同位素污染问题，故我们实习中仍用MTT法。
材料与仪器
ICR小鼠
RPMI1640培养液 Hank's液 刀豆蛋白A MTT 碘酒 酒精
无菌尖吸管 刻度吸量管 无菌解剖器械 平底培养板 CO2培养箱 酶标测定仪
RPMI1640培养液 Hank's液 刀豆蛋白A MTT 碘酒 酒精
无菌尖吸管 刻度吸量管 无菌解剖器械 平底培养板 CO2培养箱 酶标测定仪
步骤
1. 小鼠脾细胞悬液的制备
取一个灭菌的平皿，加入5 ml Hank's液。颈椎脱臼法处死小鼠，取脾脏，放入平皿中，在钢网上研磨并过筛，制成细胞悬液。取出100 μl用于计数。将其余细胞悬液移入一离心管中，离心1500 rpm，7 min，（或1000 rpm，10 min）弃去上清，用RPMI1640 培养液稀释，制成2.5×106 /ml的脾细胞悬液，然后加入ConA使每孔最终浓度为2 μg/ml，同时做不加ConA的阴性对照孔。
2. 将上述细胞悬液加入96孔平底培养板中，每孔0.1 ml。
3. 将培养板放入含有5 %CO2的37 ℃培养箱中培养48-72 小时，在培养结束前4-6 小时，于培养板各孔内加入1 mg/mlMTT液，10 μl/孔。37 ℃培养6 小时。
4. 各孔内加入0.01 M 盐酸—异丙醇110 μl，30 分钟内（或加2 %SDS100 ul/孔，过夜）用酶标测定仪测OD 值，测定波长570 nm。
注意事项
1. 由于本实验需要培养3 天，才能观察结果。因此，在操作时应注意无菌操作，避免细菌污染，导致实验的失败。
2. 细胞操作要轻柔、迅速，以免细胞损伤影响实验结果。
常见问题
一、实验结果
将实验组和对照组三个复孔的 OD 值平均。
将实验组和对照组三个复孔的 OD 值平均。
转化值=实验组的平均OD 值-对照组的平均OD 值。
来源：丁香实验
