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【原创】请教高手,我的这种设计不同种属的同源基因引物的方法是否正确?

丁香园论坛

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因为要做PCR了,但不会设计引物,今天下午在DXY和Pubmed上乱看了一下午,把自己的疑惑写出来,向大家请教。

遇到的问题:在引物设计时,找不到需要物种基因的序列,或者想能否设计一个引物,能够在不同物种之间共用(考虑到同源性的存在)。

如果能够实现,就一方面可以通过其他物种的信息设计自己需要的引物,另外,也可以合成一个引物在多种细胞动物模型上通用,减少开支。

以我下午具体的例子为例:
我需要大鼠、小鼠和人的mitofusin2基因的primer,但是如果全部分开设计,既麻烦而且贵,能否一个引物就搞定了哪?

因为我最想要大鼠的,所以我就首先查大鼠mitofusin2基因的信息:
在NCBI entrez gene的页面下输入:mitofusin2
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez
出来很多基因信息,我选择第12的一条,是Rattus norvegicus(大鼠的),然后点开。
在新页面中查看到 Homology 一项:
Homologs of the Mfn2 gene The Mfn2 gene is conserved in human, chimpanzee, dog, mouse, chicken, zebrafish, fruit fly, mosquito, and C.elegans.

Map Viewer (Human, Mouse)

点击:Homologs of the Mfn2 gene ,这个有下划线的字,进入下面该基因的同源序列页面,也就是说该页面上的基因,理论上,应该在人,小鼠,大鼠中具有同源性,根据这个序列设计的引物应该可以在三种物种中通用。

点开第一个基因:MFN2, Homo sapiens,看到General gene information下面的Markers,点开第一个:G19936(e-PCR)
Links: UniSTS:17435
这是PCR的引物,进入其引物页面:

UniSTS:17435 Links
G19936
Homo sapiens chromosome 1, locus MFN2
Pan troglodytes chromosome 1, locus MFN2

Found by e-PCR in sequences from Homo sapiens, Pan troglodytes, Pongo abelii and Rattus norvegicus.

Primer Information

Forward primer: ATACATCACCTTAAATACATCAG
Reverse primer: TTAAATTTATACCACTGAGGG
PCR product size: 154 (bp), Homo sapiens
GenBank Accession: G19936

这里有现成的设计好的引物,而且有说明该引物适合于哪些物种,这里说道还适合大鼠的,但是没有说适合小鼠的。反正就是根据这种方法,改变前面选的不同的基因和后面不同的pcr,应该可以找到适合不同种属的引物。
这里还可以清楚的看到,三种种属该基因的同源序列:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/mapview/maps.cgi?taxid=10116&chr=5&MAPS=genes-r-org/human-chr/rat%3A5,genes-r-org/mouse-chr/rat%3A5,genes-r-org/rat-chr5&query=e%3A64476[egene_id]+AND+gene[obj_type]&QSTR=mfn2&cmd=focus&fill=10

所以想请教大家一下,这个方法是否正确,是否可行。
谢谢!
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