【原创】western使用试剂汇总----实际操作版
丁香园论坛
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western使用试剂汇总
个人做western已快半年，下面把个人用过的试剂总结一下，可能每个人做的蛋白不一样会有少许出入。但以下试剂应该是必备！希望对各位新做western的朋友有个帮助。
主要产品可在公司订购。建议刚开始做先不要买小公司产品，尽量用大公司成套产品做稳定了，再想着从小公司买便宜试剂或粉剂自己配制，以节约费用。其实国内许多公司的成套试剂，质量还不错，比自己配要方便，节约时间。
一般产品公司的网站都有详细说明书，请认真查阅！为了防止被误认为是做广告嫌疑，将自己用的试剂公司名字暂略（其实主要的还是那几家），但是给出了参考价格，方便大家事先做好预算，好跟老板汇报。
好，下面是常用的试剂
我尽量按照做western的顺序来讲
一、 样品制备
货号 名称 规格 单价
P0013 Western及IP细胞裂解液 100ml 158.00元
ST506 PMSF(100mM) 10ml 92.00元
P0012S BCA蛋白浓度测定试剂盒 200次 139.00元
二、蛋白电泳
P0012A SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 1盒 139.00元
P0014A SDS-PAGE电泳液 1L 26.00元
P0015 SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X) 2ml 26.00元
P0017 考马斯亮蓝快速染色液 250ml 136.00元
P0068 彩色预染蛋白质分子量标准 200微升 368.00元
三、转膜
膜，有硝酸纤维素膜和PVDF膜两种，推荐PVDF膜，做的多就买成卷的，大约2500左右一卷，30cundefined3000cm，做得少就买一张一张的15cundefined15cm大约80元一张。膜的孔径分22um和40多um的，孔径校，蛋白不容易转通。基本都是进口膜！质量应该不差。
P0021A Western转膜液 1L 30.00元
P0022 丽春红染色液 120ml 85.00元
四、抗体孵育
P0023B Western封闭液 100ml 96.00元 （PS：也可以用5%脱脂牛奶代替专用封闭液，光明牌，大约三十一包，超市有卖！如用牛奶配请自行调整浓度一般在3-10%之间）
P0023A Western一抗稀释液 100ml 96.00元
一抗 请订购外国公司产品如sant cruse、sigma、 ABcam，大公司产品质量稳定，效价高！节省时间！
内参：下面三种常见内参请根据自己试验挑选，网站有说明
AT819 Tubulin抗体 >40次 378.00元
AA128 Actin抗体 >40次 378.00元
AG019 GAPDH抗体 >40次 378.00元
二抗、根据一抗的种类来定，一般从代理那里订购外国公司一抗，免费赠送二抗！推荐北京中杉或者武汉博士德二抗，性价比不错！大约100一支。
洗膜用吐温和PBS配，现用现配
PBS 买武汉博士德或北京中杉的，1L/包，大约4-5元一包，先买十包，若是两个蛋白，认真做重复三次的话，估计买个100包也不会嫌多。
ST825 Tween-20/吐温-20 100ml 39.00元
五、显影
P0018 BeyoECL Plus 共100ml 258.00元
还有若要做DAB显色的话可以向代理买北京中杉的DAB染色液，100多一盒。
显影液、定影液向代理(025-52983612)购买，比碧云天便宜！大约25一包，一包可配1加仑，约3.75L。
胶片，买柯达的就可以一包，100张，160元左右。
红灯，照相器材市场有卖，买10元一个的冷光源红灯，不会曝光片子。
其它试剂请参见western操作手册，如果有兴趣，部分试剂可以自己按照手册内容配置。
个人做western已快半年，下面把个人用过的试剂总结一下，可能每个人做的蛋白不一样会有少许出入。但以下试剂应该是必备！希望对各位新做western的朋友有个帮助。
主要产品可在公司订购。建议刚开始做先不要买小公司产品，尽量用大公司成套产品做稳定了，再想着从小公司买便宜试剂或粉剂自己配制，以节约费用。其实国内许多公司的成套试剂，质量还不错，比自己配要方便，节约时间。
一般产品公司的网站都有详细说明书，请认真查阅！为了防止被误认为是做广告嫌疑，将自己用的试剂公司名字暂略（其实主要的还是那几家），但是给出了参考价格，方便大家事先做好预算，好跟老板汇报。
好，下面是常用的试剂
我尽量按照做western的顺序来讲
一、 样品制备
货号 名称 规格 单价
P0013 Western及IP细胞裂解液 100ml 158.00元
ST506 PMSF(100mM) 10ml 92.00元
P0012S BCA蛋白浓度测定试剂盒 200次 139.00元
二、蛋白电泳
P0012A SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 1盒 139.00元
P0014A SDS-PAGE电泳液 1L 26.00元
P0015 SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X) 2ml 26.00元
P0017 考马斯亮蓝快速染色液 250ml 136.00元
P0068 彩色预染蛋白质分子量标准 200微升 368.00元
三、转膜
膜，有硝酸纤维素膜和PVDF膜两种，推荐PVDF膜，做的多就买成卷的，大约2500左右一卷，30cundefined3000cm，做得少就买一张一张的15cundefined15cm大约80元一张。膜的孔径分22um和40多um的，孔径校，蛋白不容易转通。基本都是进口膜！质量应该不差。
P0021A Western转膜液 1L 30.00元
P0022 丽春红染色液 120ml 85.00元
四、抗体孵育
P0023B Western封闭液 100ml 96.00元 （PS：也可以用5%脱脂牛奶代替专用封闭液，光明牌，大约三十一包，超市有卖！如用牛奶配请自行调整浓度一般在3-10%之间）
P0023A Western一抗稀释液 100ml 96.00元
一抗 请订购外国公司产品如sant cruse、sigma、 ABcam，大公司产品质量稳定，效价高！节省时间！
内参：下面三种常见内参请根据自己试验挑选，网站有说明
AT819 Tubulin抗体 >40次 378.00元
AA128 Actin抗体 >40次 378.00元
AG019 GAPDH抗体 >40次 378.00元
二抗、根据一抗的种类来定，一般从代理那里订购外国公司一抗，免费赠送二抗！推荐北京中杉或者武汉博士德二抗，性价比不错！大约100一支。
洗膜用吐温和PBS配，现用现配
PBS 买武汉博士德或北京中杉的，1L/包，大约4-5元一包，先买十包，若是两个蛋白，认真做重复三次的话，估计买个100包也不会嫌多。
ST825 Tween-20/吐温-20 100ml 39.00元
五、显影
P0018 BeyoECL Plus 共100ml 258.00元
还有若要做DAB显色的话可以向代理买北京中杉的DAB染色液，100多一盒。
显影液、定影液向代理(025-52983612)购买，比碧云天便宜！大约25一包，一包可配1加仑，约3.75L。
胶片，买柯达的就可以一包，100张，160元左右。
红灯，照相器材市场有卖，买10元一个的冷光源红灯，不会曝光片子。
其它试剂请参见western操作手册，如果有兴趣，部分试剂可以自己按照手册内容配置。
