包涵体提出、纯化、复性必胜技

下列方法已在本实验室验证，复性任何包涵体，必定能得到目的蛋白：

菌体为超声法裂解，裂解溶液中含
50mM Tris-HCl, pH 8.0，
100mM NaCl，
5mM EDTA，
0.1% NaN3，
0.5% Triton-X100，
在使用前加入 0.1mM PMSF

每250毫升裂解液中加入约50克菌体，工作15s，间隔15秒，超声破碎45分钟，超声后加入10mM MgSO4 和0.1mg/ml 的溶菌酶和Dnase 0.01mg/ml，室温放置20分钟，6000RPM离心15分钟，保留沉淀。

再次加入裂解液，超声破细胞后，加溶菌酶和Dnase, 上述过程重复三次。

用下述的溶液将包涵体悬浮，离心收集包涵体。
50mM Tris-HCl, pH 8.0
100mM NaCl
5mM EDTA
0.1% NaN3

用下述溶液悬浮包涵体，离心收集包涵体。
50mM Tris-HCl, pH 8.0
100mM NaCl
5mM EDTA
0.1% NaN3
1M 尿素
如暂时不用，放入－20℃保存。

包涵体的溶解
将包涵体悬浮在下述溶液中，4℃振荡过夜。
100mM Tris
50mM Glycine
8.5M 尿素
溶液用HCl调节到pH 8.0后加入
25mM DTT

6000RPM离心，取上清，去除不溶解物。

包涵体蛋白的复性

将溶解的包涵体装入透析袋，在4℃下将透析袋浸入下列溶液依次透析：
0.1M Tris
0.4M L-Arginine
1 mM EDTA
0.2mM PMSF
4M 尿素 溶液pH调节到8.0
透析24小时

0.1M Tris
0.4M L-Arginine
1 mM EDTA
0.2mM PMSF
2M 尿素 溶液pH调节到8.0
透析24小时

0.1M Tris
0.4M L-Arginine
1 mM EDTA
0.2mM PMSF
1M 尿素 溶液pH调节到8.0
透析24小时

0.1M Tris
0.4M L-Arginine
1 mM EDTA
0.2mM PMSF
0 M 尿素 溶液pH调节到8.0
透析24小时

0.025M Tris
0.1M L-Arginine
0.25 mM EDTA
0.2mM PMSF
0 M 尿素 溶液pH调节到8.0
透析24小时

10mM Tris-HCl pH8.0
150mM NaCl,
1mM EDTA
0.02% NaN3.
透析24小时

透析时注意透析袋的截留分子量

下面的工作就简单了，因为复性的蛋白已经在生理缓冲液中，进行阴阳离子交换层析爱怎么整就怎么整它了。