【求助】凋亡通路问题
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最近做某种抑癌基因促进肿瘤细胞凋亡，做了western检测，caspase3，8，9，fas，BID，cytc，发现fas上调，caspase8，3下调，说明fas通路活化；BID下调，caspase9下调，我觉得应该是caspase8通过BID裂解激活线粒体通路，但是测cyt c却是下调，按理应该线粒体通路激活引起cytc释放，应该增多才对啊，这样解释不通，请高手指教是哪里的问题呢？可以不考虑cyt c吗？那怎么解释BID和caspase9的下调呢，对凋亡通路了解太少。
请教各位老师，别让我得帖子沉下去呀！谢谢了。
饿 也许是你实验的问题？不把你实验方案说详细点 估计大家都不愿意在这儿瞎猜。。。
PS 我也等待有回答~
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也可能是实验方法的问题。我的实验是这样的，在某种肿瘤细胞转染一个抑癌基因X，转染后引起肿瘤细胞凋亡率增加，进一步探讨对凋亡通路的影响，我检测了Fas凋亡通路的Fas，FasL，caspase8，caspase3，还有线粒体通路的cyt-c，Bid，caspase9，结果是Fas通路可以说的通是活化的，但是线粒体通路检测是BId，cyt-c，caspase9均下调，而线粒体通路活化应该是bid，caspase9下调，cyt-c上调，解释不通，但如果没有引起cytc-c释放，那为什么线粒体通路的下游caspase9下调活化了呢？我表达可能有问题，不知道说清楚 没有。
凋亡我是不懂啦。。不过cyt-c你怎么检测的？
检测cyt－c是提取细胞总蛋白做western blot。我看很多帖子都说提取的总蛋白里面的基本都是胞浆的cyt－c，线粒体中的一般提取不到。所以就是代表胞浆中的。
不知道你看了哪些帖子这么说的。。我看文献上都是分离后分别检测的。要看到线粒体里的少了 胞浆里的多了才能说是释放。就算你说的没错，这么做也不能说服审稿人吧
楼上说的cyt c的检测有道理，应该要有线粒体和胞浆各自的一个变化情况，还有关于你说的推断线粒体通路激活的判断不成立吧，明显证据不充分，还有这样的实验要多次重复哦
redbri wrote:
楼上说的cyt c的检测有道理，应该要有线粒体和胞浆各自的一个变化情况，还有关于你说的推断线粒体通路激活的判断不成立吧，明显证据不充分，还有这样的实验要多次重复哦
那如果线粒体中的cytc减少，胞浆中增多，而且Bid下调，caspase-9下调，能不能推断线粒体通路激活呢。
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