【求助】凋亡通路问题
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最近做某种抑癌基因促进肿瘤细胞凋亡,做了western检测,caspase3,8,9,fas,BID,cytc,发现fas上调,caspase8,3下调,说明fas通路活化;BID下调,caspase9下调,我觉得应该是caspase8通过BID裂解激活线粒体通路,但是测cyt c却是下调,按理应该线粒体通路激活引起cytc释放,应该增多才对啊,这样解释不通,请高手指教是哪里的问题呢?可以不考虑cyt c吗?那怎么解释BID和caspase9的下调呢,对凋亡通路了解太少。
请教各位老师,别让我得帖子沉下去呀!谢谢了。
饿 也许是你实验的问题?不把你实验方案说详细点 估计大家都不愿意在这儿瞎猜。。。
PS 我也等待有回答~
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也可能是实验方法的问题。我的实验是这样的,在某种肿瘤细胞转染一个抑癌基因X,转染后引起肿瘤细胞凋亡率增加,进一步探讨对凋亡通路的影响,我检测了Fas凋亡通路的Fas,FasL,caspase8,caspase3,还有线粒体通路的cyt-c,Bid,caspase9,结果是Fas通路可以说的通是活化的,但是线粒体通路检测是BId,cyt-c,caspase9均下调,而线粒体通路活化应该是bid,caspase9下调,cyt-c上调,解释不通,但如果没有引起cytc-c释放,那为什么线粒体通路的下游caspase9下调活化了呢?我表达可能有问题,不知道说清楚 没有。
凋亡我是不懂啦。。不过cyt-c你怎么检测的?
检测cyt-c是提取细胞总蛋白做western blot。我看很多帖子都说提取的总蛋白里面的基本都是胞浆的cyt-c,线粒体中的一般提取不到。所以就是代表胞浆中的。
不知道你看了哪些帖子这么说的。。我看文献上都是分离后分别检测的。要看到线粒体里的少了 胞浆里的多了才能说是释放。就算你说的没错,这么做也不能说服审稿人吧
楼上说的cyt c的检测有道理,应该要有线粒体和胞浆各自的一个变化情况,还有关于你说的推断线粒体通路激活的判断不成立吧,明显证据不充分,还有这样的实验要多次重复哦
redbri wrote:
楼上说的cyt c的检测有道理,应该要有线粒体和胞浆各自的一个变化情况,还有关于你说的推断线粒体通路激活的判断不成立吧,明显证据不充分,还有这样的实验要多次重复哦
那如果线粒体中的cytc减少,胞浆中增多,而且Bid下调,caspase-9下调,能不能推断线粒体通路激活呢。
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