【讨论】碱裂解法大规模质粒提取，自己配的溶液提出2000ug/ml的质粒啊
丁香园论坛
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我自己配的溶液
按的是这样的步骤
1.收集400ml菌液的沉淀于50ml离心管中，加入7ml冰预冷的STE，震荡至彻底悬浮。（此时，共收集了4管细菌沉淀）
2. 2管合为1管，然后，4000-5000g，4℃离心15min，弃上清，倒置，使液体流净。
3.将收集的菌体用8ml溶液I悬浮，混匀。
4.加入16ml新鲜配制的溶液II，盖紧离心管盖，温和上下颠倒混匀5-7次，室温放置（最好冰上放置）5min，切忌延长时间，可适当缩短。
5.加入12ml冰预冷的溶液III，温和上下颠倒混匀，避免强烈震荡，冰上放置10min。此时，形成的沉淀为细菌染色体DNA，大分子量RNA，蛋白质/钾盐/细胞膜的混合物。
6.12000g，4℃离心20min
7、取上清至一个干净的50ml离心管中，为了防止蛋白沉淀，可二次离心7min，取上清至一个干净的50ml离心管中，加入0.6倍容积的异丙醇混匀，室温放置10min
8.12000g，室温离心15min。4℃离心将导致大部分盐析出混入沉淀。
9.用70%乙醇室温漂洗一次，12000g离心5min，小心弃上清，倒置离心管在滤纸上，流净乙醇，或用消毒滤纸条小心擦净管壁上乙醇，室温放置5min使乙醇蒸发。
10.加入1ml的TE，PH8.0。溶解DNA沉淀。
我没有用酚氯仿抽提，因为等体积的话就要200-300ml呢，我想着提出来再抽提也行。
用的eppendorf测质粒浓度的那个机器，分光光度的那种吧
浓度有2000ug/ml ， 260/280 2.00左右 260/230 2.1左右
我感觉有点不可思议啊 这样有4ml质粒的话 就8mg左右了 我自己配的溶液能提出这么多质粒？我有点不相信自己了
按的是这样的步骤
1.收集400ml菌液的沉淀于50ml离心管中，加入7ml冰预冷的STE，震荡至彻底悬浮。（此时，共收集了4管细菌沉淀）
2. 2管合为1管，然后，4000-5000g，4℃离心15min，弃上清，倒置，使液体流净。
3.将收集的菌体用8ml溶液I悬浮，混匀。
4.加入16ml新鲜配制的溶液II，盖紧离心管盖，温和上下颠倒混匀5-7次，室温放置（最好冰上放置）5min，切忌延长时间，可适当缩短。
5.加入12ml冰预冷的溶液III，温和上下颠倒混匀，避免强烈震荡，冰上放置10min。此时，形成的沉淀为细菌染色体DNA，大分子量RNA，蛋白质/钾盐/细胞膜的混合物。
6.12000g，4℃离心20min
7、取上清至一个干净的50ml离心管中，为了防止蛋白沉淀，可二次离心7min，取上清至一个干净的50ml离心管中，加入0.6倍容积的异丙醇混匀，室温放置10min
8.12000g，室温离心15min。4℃离心将导致大部分盐析出混入沉淀。
9.用70%乙醇室温漂洗一次，12000g离心5min，小心弃上清，倒置离心管在滤纸上，流净乙醇，或用消毒滤纸条小心擦净管壁上乙醇，室温放置5min使乙醇蒸发。
10.加入1ml的TE，PH8.0。溶解DNA沉淀。
我没有用酚氯仿抽提，因为等体积的话就要200-300ml呢，我想着提出来再抽提也行。
用的eppendorf测质粒浓度的那个机器，分光光度的那种吧
浓度有2000ug/ml ， 260/280 2.00左右 260/230 2.1左右
我感觉有点不可思议啊 这样有4ml质粒的话 就8mg左右了 我自己配的溶液能提出这么多质粒？我有点不相信自己了
有人也自己配
50ml菌液 收5mg
我也不信 但人家确实做出来
50ml菌液 收5mg
我也不信 但人家确实做出来
很好！质粒抽提效果取决于细菌数量、质粒拷贝数及提取方法。
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